瞬時轉染

瞬時轉染(transient transfection)是將DNA導入真核細胞的方式之一。在瞬時轉染中,重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時但高水平的表達。轉染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩定轉染較短時間內收穫轉染的細胞,並對溶解產物中目的基因的表達進行檢測。

基本介紹

  • 中文名:瞬時轉染
  • 外文名:transient transfection
  • 作用:收穫轉染細胞,檢測目的基因表達
  • 備註:將DNA導入真核細胞的方式之一
基本定義,特點,

基本定義

瞬時轉染(transient transfection)是將DNA導入真核細胞的方式之一。在瞬時轉染中,重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時但高水平的表達。轉染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩定轉染較短時間內收穫轉染的細胞,並對溶解產物中目的基因的表達進行檢測。

特點

瞬時表達法具有很多優點:
第一,操作簡易和周期短。傳統的穩定轉化系統,從轉化到獲得轉基因植株至少需要幾個月甚至更長的時間,且轉化效率比較低,瞬時表達系統僅需要2~4 周,避免了繁瑣的植物組織培養過程(Kapila et al., 1997);
第二,表達效率高。當單鏈的T-DNA 進入植物細胞後,不但轉化到植物基因組中的基因可以表達,許多未整合到植物基因組中的游離外源基因同樣可以表達,拷貝數更高。其表達不受基因位置和基因沉默的影響,因而表達效率更高,可達穩定轉化表達量的數倍(Janssenand Gardner, 1990; Kapila et al., 1997; Yang et al.,2000; Wroblewski et al., 2005);
第三,安全高效。穩定表達的轉基因植物存在食物鏈污染,花粉傳播引起的基因漂移等轉基因安全問題(Twyan et al., 2003),瞬時表達中的基因轉移及其表達是一個獨立的過程,不產生可遺傳的後代,其生物安全性要高的多,且試驗結果更為直觀可靠;
第四,不需要篩選基因。穩定的轉基因轉化通常需要抗生素或其他篩選基因進行初步篩選,其轉基因植株也相對存在著轉基因安全問題,瞬時表達無需篩選基因,減少了轉基因中抗生素等帶來的不安全因素,同時載體可以更小,更容易轉化較大的目的片段和多個基因;
第五,能在完整植株上進行。在分析外源基因表達的互作與生物或非生物脅迫時,能夠更真實的反應植物體內的基因表達模式。

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