病原微生物基因擴增檢測

病原微生物基因擴增檢測（PCR）是基因擴增技術的一次重大革新。可將極微量的靶DNA特異性擴增上百萬倍，從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力，能檢測單分子DNA或每10萬個細胞中僅含1個靶DNA分子的樣品，因而此方法在分子生物學、微生物學、醫學及遺傳學等多領域廣泛套用和迅速發展。

基本介紹

• 中文名：病原微生物基因擴增檢測
• 臨床意義：有助於疾病預後的判斷療效的監測

原理

先將含有所需擴增分析的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩條寡聚核苷酸單鏈，然後加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與靶DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物。此引物範圍就在包括所欲擴增的DNA片段，一般需20-30個鹼基對，過少則難保持與DNA單鏈的結合。引物與互補DNA結合後，以靶DNA單鏈為模板，在Taq DNA聚合酶的作用下以4種脫氧核苷酸（dNTP）為原料按5'到3'方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新複製成雙鏈。然後又開始第二次循環擴增。

檢測方法

過去標準的PCR操作程式是將PCR必需反應成份分別加入一微量離心管中，然後置於一定的循環參數條件下進行循環擴增。
1.向一微量離心管中依次加入DNA模板、引物、dNTP、10×PCR緩衝液、ddH2O，混勻後離心15s使反應成分集於管底。以上步驟僅在實驗研究用，現在商品化試劑已將dNTP、10×PCR緩衝液，引物，ddH2O混合在一起，反應體積為20~25μL，只要試驗人員加入處理好的含有靶DNA的模板就可以。
2.PCR的循環程式：根據實驗室使用的試劑說明書進行設定。

臨床意義

PCR技術快速、簡便、敏感性和特異性高，臨床檢測中套用廣泛，不僅能滿足病毒性疾病速診斷的需要，還有助於疾病預後的判斷、療效的監測等。