牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個胺基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的套用。

基本介紹

• 中文名：牛血清白蛋白
• 外文名：Bovine albumin
• 分子式：N/A
• 分子量：66.446KDa

簡介

中文同義詞：

蛋白粉；牛白蛋白；卵蛋白粉；血清蛋白；血清白蛋白；牛血蛋白質；複合胺基酸；牛血清蛋白；牛血清白蛋白；血清白蛋白（牛）

CAS號：	9048-46-8
英文名稱：	Bovine albumin
中文名稱：	牛血清白蛋白
CBNumber:	CB5107573
分子式：	N/A
英文別名：	Bovine serum albumin

主要成份

蛋白質

是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細胞促進細胞附著；α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促細胞附著；轉鐵蛋白能結合鐵離子，減少其毒性和被細胞利用。

多肽

血小板促生長因子能促細胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細胞增殖因子；成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細胞生長也有一定作用。

激素

激素對細胞的作用是多方面的。

胰島素：促進細胞攝取葡萄糖和胺基酸，與促細胞分裂有關。

類胰島素生長因子：能與細胞表達的胰島素受體結合，從而有胰島素同樣的作用。

促生長激素：促細胞增殖效應。

4其他成份

胺基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養成分的合成培養基意義不大。與蛋白相結合狀態的微量元素對細胞培養有意義。

結構與作用

成分結構

牛血清中的簡單蛋白，是血液的主要成分（38g/1000ml），分子量68kD。等電點4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個胺基酸殘基組成，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩衝作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個胺基酸殘基，分子量為66.430 Da，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的套用，例如在western blot中作為Blocking agent。

產品

作用

BSA一般做為穩定劑被用於限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中，因為有些酶在低濃度下不穩定或活性低。加入BSA後，它可能起到“保護”或“載體”作用，不少酶類添加 BSA後能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什麼影響。對多數底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，並可實現重複切割。在37℃，酶切反應超過1h時，BSA可以使酶更加穩定，因為在不含BSA的反應緩衝液中，許多限制性內切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩衝液或底物DNA中抑制限制性內切酶活性的金屬離子和其它化學物質。

緩衝液

1.BSA是酶的穩定劑，防止酶的分解和非特異性吸附；

圖表

2.BSA能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環境因素如加熱，表面張力及化學因素引起的變性的至於作用機理我不是很清楚，可能是因為它結構中有17個二硫鍵，和一個巰基，巰基的化學反應很活潑，二硫鍵有抗氧化還原的作用，因此可與多種陽離子，陰離子和小分子結合；

3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。

用途

1、用於生化研究、遺傳工程和醫藥研究

2、用作醫藥保健食品、調味品

3、維持滲透壓、pH緩衝、載體作用

4、在PCR體系中有助於Taq酶的穩定性及活性，可以提高PCR的效率

生產方法

以牛血為原料分離出血清，用硫酸銨分級沉澱後，經辛酸處理精製而得。

貯存方法

每10克加100毫升水進行溶解，或用 PBS溶解也可，視用途而決定。然後分裝成小支。若不使用防腐劑可貯存在零下20或30攝氏度的恆溫櫃中，若使用防腐劑（如0.1%疊氮化鈉）則可貯存在零上4攝氏度的環境下。一般可存放數月不變質。防腐劑可能對牛血清白蛋白的效果造成影響，應慎用。

牛血清白蛋白的套用

牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的套用, 例如在WB實驗中加入BSA, 通過提高溶液中蛋白質的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，減輕不利環境因素如加熱，表面張力及化學因素引起的變性的。

測定蛋白濃度

按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標準）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度：測定A562，依標準曲線算出蛋白濃度。

SDS-PAGE電泳

1 制 膠: 按比例配製分離膠，緩緩地搖動溶液，使激活劑混合均勻，將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中，再在液面上小心注入一層水，以阻止氧氣進入凝膠溶液中，靜置40min。同前按比例配製濃縮膠，但混勻溶液時不要過於劇烈以免引入過多地氧氣。吸去不連續系統中下層分離膠上的水分，連續平穩的注入凝膠溶液，然後小心插入梳子並注意不得在齒尖留有氣泡，靜制60min以上以保證完全聚合。

2 預電泳： 將聚合好的凝膠安置於電泳槽中，小心拔去梳子，加入電泳緩衝液後低電壓10-20V的預電泳20-30min。（目的是清除凝膠內的雜質， 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通）。

3 樣品準備：首先計算上樣體積，然後按樣品：上樣buffer=4：1的比例加入上樣bufer混勻，沸水10分鐘，冰上5分鐘。

4 加 樣： 預電泳後依次加入標準品（Marker）和待分析樣品。（加樣時間要儘量短，以免樣品擴散，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩衝液避免邊緣效應。每個泳道加5ul 。

5 電 泳： 加樣完畢，選擇80V恆壓進行電泳，電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處（一般約20分鐘），更換至100V恆壓電泳，電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處，即停止電泳（一般約為1小時20分鐘）。