失活的牙質片層用作骨重吸收培養基。這些片層以5 mm直徑的牙質薄片形式提供(正常厚度為0.3 mm).每批培養基均經過檢測以確保被有功能的破骨細胞重吸收。另可提供預重吸收的樣品片層以便於體外重吸收功能鑑定。 牙質片層以50片一包形式供應，包裝於已消毒的旋轉蓋封容器內。該片層通過紫外線殺菌並且只能在無菌環境（如層流櫃）中打開。 該產品可在室溫下儲存。如果容器不打開且片層保持乾燥，在保質期內不會出現變質。
基本介紹
- 中文名：牙質片層
- 外文名：Dentin layer
套用,一般使用說明,舉例體外產生人破骨細胞的方法,其它骨位點產品,參考文獻,
套用
該產品被設計利用"骨切片檢測"以實現體外骨重吸收量化（1,2）,在"骨切片檢測"中，培養的破骨細胞在礦化的底層挖掘出真正的骨重吸收間隙.從該檢測的第一個表述開始，在過去的16年間（1,2），該檢測已被廣泛地套用於研究許多因素對骨重吸收的影響且是當今體外骨重吸收研究使用最廣泛的方法（3-8）. 骨切片檢測能與從實驗動物（包括小鼠，大鼠，雞，兔和貓）的骨分離的破骨細胞同時使用.它已被廣泛用於研究通過直接分離於骨或培養自骨髓培養基的人破骨細胞重吸收 ⑷. 該領域當今主要優勢之一是通過RANK配基的增加從外周紅細胞誘導破骨細胞形成的技術的發展⑼.利用這項技術，大量功能性破骨細胞能被激活，被激活的功能性破骨細胞將在包括骨位點重吸收的牙質片層在內的礦化底層挖掘出重吸收間隙.重吸收很容易被反射光顯微鏡方法而量化（3,4,6,8）.
一般使用說明
⒈牙質片層在已消毒的塑膠容器中提供.僅允許在無菌環境（如層流櫃）中打開.
⒉打開容器後，需使用消毒鑷子移開消毒棉塞.然後片層應通過顛倒試管轉移至已消毒的皮氏培養皿.
⒊用細鑷子將片層移至培養皿備用，注意不要刮到牙質表層.該片層被設計可套用在標準的96孔組織培養盤中，但是它們也能在任何類型的組織培養容器中使用.
⒋在增加細胞之前，牙質片層應被預加濕至少1小時.應使用消毒磷酸鹽緩衝液或組織培養方法.
⒌去除預加濕液後，加入細胞懸濁液.加入的細胞數量取決於破骨細胞來源和實驗設計.重吸收由光顯微鏡法進行分析，這樣就有可能測量單個破骨細胞的活性.然而，在大部分實驗方案中，加入更多的破骨細胞將更合適（但是一般要少於200/牙質片）.
⒍使用的沉澱時間也取決於破骨細胞來源和實驗設計.成熟的破骨細胞將在1小時內附在牙質片層，但是在許多方案中將需要更長的沉澱時間.培養基能通過使用包括自動移液管在內的標準組織培養技術和設備而被改變.
⒎由成熟破骨細胞導致的重吸收在培養12小時後可被檢測出.培養的時間將取決於實驗設計.
⒏如果使用液態固定液，牙質片層可在組織培養容器中固定.撤除受限的培養基且用磷酸鹽緩衝液或組織培養基沖洗組織培養孔兩次，再加入固定液.常使用的固定液是4%的戊二醛（用0.2M的甲胂酸鈉溶液配成）.
⒐重吸收凹點能在多種標準組織學菌株著色後鑑定.我們推薦1%的甲苯胺藍（用0.5%四硼酸鹽溶液配成）.牙質片層應在此甲苯胺溶液中染色3分鐘.多餘的染料通過沖洗去除，然後在非蒸餾水中漂洗並風乾.已染色的片層可即在室溫下長期保存.
⒑重吸收陷窩能通過多種途徑鑑定，包括掃描電鏡和光學顯微鏡.我們推薦使用反射光學顯微鏡.
⒒使用者應考慮一些推薦的方法以確定最合適他們需要的技術.
舉例體外產生人破骨細胞的方法
這個方法使用20 mL的外周血細胞將可提供適用於近50個牙質片層的足夠的破骨細胞.
⒈準備已消毒的牙質片層並置於96孔板的微孔中.每孔一個牙質片層.加入100 L的最低必需培養基（MEM) 加10%的小牛胎血清（FCS）到每個預濕的牙質片層孔中.
⒉混合20 mL的肝素抗凝的外周血和20 mL的MEM .準備有5個5 ml Histopaque9（∑）的Falcon試管並加入8 ml的外周血細胞懸浮液.在450 g下離心30分鐘並輕輕倒出淡黃色表面層.
⒊在10 mL的MEM 清洗淡黃色表面層並在1500 rpm離心20分鐘.重懸浮的細胞小球在4 mL的MEM 加10% FCS並使用血球儀計算細胞數量（注意：細胞的濃度將取決於淡黃色表面層的效率）. 4. 一旦細胞計算出數量加入大約20 l的約500,000細胞介質到96孔板的每個微孔中.放入孵育器並離開1小時.
⒌在孵育期後每孔用抽出的介質清洗3次並加入新鮮的介質.最後用100 l的新製成的MEM 加10% FCS代替，加入RANK ligand （30 ng/mL）和M-CSF （25 ng/mL).
⒍每2至3天更換介質溶液.破骨細胞將在2周后形成並且這個過程可以用牙質片層的消減和染色進行監測.
⒎在最開始培養的2個星期，潛在催化劑的作用或骨染色體異常轉化抑制劑可加入到培養介質中.
⒏在培養的第三個星期在牙質片層上出現廣泛的重吸收，在這個時期可以用於評估潛在抑制或催化骨重吸收物質的效果.
⒐牙質片層用甲苯胺藍染色和用反射顯微鏡分析重吸收的程度.
其它骨位點產品
用於免疫診斷
PTHrP N-Terminal,PTHrP （1-34）
Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0402
PTHrP Mid-molecule,PTHrP （43-52）
Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0102
PTHrP Far C-Terminal,PTHrP （144-152）
Rabbit Anti-Human Polyclonal Antibody - Code
RZ-AE-0302（兔抗人多克隆抗體）
Osteoclast Antigen （破骨細胞抗原）
Mouse Anti-Human Monoclonal Antibody - Code
RZ- AE-4002（小鼠抗人單克隆抗體）
Osteoarthritis Matrix Antigen （骨關節炎矩陣抗原）
Mouse Anti-Human Monoclonal Antibody - Code
RZ-AE-6002
參考文獻
⒈Boyde A,Ali N N and Jones S J （1984） Resorption of dentine by isolated osteoclasts in vitro. Br. Dent. J. 156:216-220.
⒉Chambers T J,Revell P A,Fuller K and Athanasou N （1984） Resorption of bone by isolated rabbit osteoclasts. J. Cell Sci. 55:383-399.
⒊Walsh C A,Beresford J N,Birch M A,Boothroyd B and Gallagher J A （1991） Application of reflected light microscopy to identify and quantitate resorption by isolated osteoclasts. J. Bone Miner. Res. 6:661-671.
⒋Walsh C A,Carron J A and Gallagher J A （1996） The isolation of osteoclasts from human giant cell tumours and long-term marrow cultures. In 'Human Cell Culture Protocols' Ed. G.E. Jones,Humana Press Inc. pp 233-262.
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⒐Itonaga I,Sabokbar A,Neale S D,and Athanasou N A （1999） 1,25 Dihydroxyvitamin D3 and prostaglandin E3 act directly on circulating human osteoclast precursors. Biochem. Biophys. Res. Comm. 264:590-595.
