溶血空斑實驗

溶血空斑實驗原理是將綿羊紅細胞免疫的家兔或小鼠，取家兔淋巴結或小鼠脾細胞製成細胞懸液，與高濃度綿羊紅細胞混合後加入瓊脂糖凝膠中，其中每個釋放溶血性抗體的B淋巴細胞在補體的參與下可溶解周圍的綿羊紅細胞，在周圍形成一個可見的空斑，一個空斑代表一個抗體形成細胞，空斑的數量反映機體的體液免疫功能。

基本介紹

• 中文名：溶血空斑實驗
• 作用：取家兔淋巴結製成細胞懸液
• 功能：檢測實驗動物抗體形成細胞的功能
• 原料：綿羊紅細胞

操作方法

現在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗。SPA能與人及多數哺乳動物IgG的Fc段呈非特異性結合，利用這一特徵，首先將SPA包被SRBC，然後進行溶血空斑測定，可提高敏感度和套用範圍。

在該測試系統中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細胞產生的免疫球蛋白結合形成複合物，複合物上的Fc段可與連線在SRBC上的SPA結合，同時激活補體，使SRBC溶解形成空斑。此法可用於檢測人類外周血中的IgG產生細胞，與抗體的特異性無關。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC，可測定相應免疫球蛋白的產生細胞，這種試驗稱為反相空斑形成試驗。

其它測試

直接

經典的溶血斑試驗用於檢測實驗動物抗體形成細胞的功能，其原理是將綿羊紅細胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾細胞，加入SRBC及補體，混合在溫熱的瓊脂溶液中，澆在平皿內或玻片上，使成一蒲層，置37℃溫育。由於脾細胞內的抗體生成細胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補體參與下導致SRBC溶血，形成一個肉眼可見的圓形透明溶血區而成為溶血空斑（plaque）。每一個空斑表示一個抗體形成細胞，空斑大小表示抗體生成細胞產生抗體的多少。這種直接法所測的細胞為IgM生成細胞，其他類型Ig由於溶血效應較低，不能直接檢測，可用間接檢測法。

間接

間接測試即在小鼠脾細胞和SRBC混合時，再加抗鼠Ig抗體（如兔抗鼠Ig），使抗體與細胞所產生的IgG或IgA與抗Ig抗體結合成複合物，此時能激活補體途徑導致SRBC發生溶血，稱間接空斑試驗。

但是上述直接和間接空斑形成試驗都只能檢測抗紅細胞抗體的產生細胞，而且需要事先免疫，難以檢測人類的抗體產生情況。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應的抗體產生細胞，這種非紅細胞抗體溶血空斑試驗稱為空斑形成試驗，它的套用範圍較大。