染色體步查採用一段分離自某一重組體一端的非重複DNA片段作為探針以鑑定含有相鄰序列的重組克隆。
基本介紹
- 中文名：染色體步查
- 外文名：chromosome walking
- 作用：鑑定含有相鄰序列的重組克隆。
- 採用：非重複DNA片段
簡介,改良方法,實驗,套用,
簡介
改良方法
利用染色體步行法,從已知DNA序列克隆側翼未知序列是非常有效方法之一,可是所選用的特定限制性內切酶對目標基因組不能酶解成合適大小的片段,因而受 PCR擴增能力的局限,一般擴增不出有效產物.針對這一點,這裡介紹一種簡單有效改良方法,它包括以下步驟:首先用不同的限制性內切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目標基因組DNA,接著,選擇能將基因組酶切成彌散、分布均勻的限制性內切酶,如DraⅠ和HindⅢ,合成相對應的接頭;然後,選擇彌散的、分布均勻的限制性內切酶的酶解產物,構建成含相應接頭的基因組DNA文庫,用作PCR的模板;最後,用接頭引物和特異引物,通過巢式PCR擴增目的片段,獲得了理想的擴增效果.採用改進後的染色體步查法,有效地從較複雜的棉花核DNA中克隆出6個棉花啟動子序列.
實驗
用染色體步行法,從已知 DNA序列克隆側翼未知序列是非常有效的方法之一,由於所選用的特定限制性內切酶對目標基因組不能酶解成合適大小的片段,因而受PCR擴增能力的局限,往往擴增不出有效產物。 一種改良的啟動子序列克隆的染色體步查法利用染色體步行法。
DNA
DNA套用
染色體步移技術主要有以下幾方面的套用：
染色體
染色體①根據已知的基因或分子標記連續步移，獲取人、動物和植物的重要調控基因，可以用於研究結構基因的表達調控。如分離克隆啟動子並對其功能進行研究；
②步查獲取新物種中基因的非保守區域，從而獲得完整的基因序列；
③鑑定T-DNA或轉座子的插入位點，鑑定基因槍轉基因法等轉基因技術所導致的外源基因的插入位點等；
④用於染色體測序工作中的空隙填補，獲得完整的基因組序列；
⑤用於人工染色體PAC、YAC和BAC的片段搭接。
