《新型環形病毒HGyV/AGV2分子流行及其致病性》是依託揚州大學，由邵紅霞擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新型環形病毒HGyV/AGV2分子流行及其致病性
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：邵紅霞
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
雞傳染性貧血病毒（CAV）是圓環病毒科環形病毒屬中最早被鑑定，也是目前該屬中唯一經細胞培養分離到的成員。自2011年，CAV相關的新型環形病毒序列HGyV/AGV2，GyV3，GyV4，GyV5以及GyV6，不僅在雞體中被鑑定；而且在人的皮膚棉試、血液以及糞便樣品中鑑定。提示，研究這些新型環形病毒具有潛在的公共衛生意義。那么，這些新型環形病毒是否與CAV一樣，對雛雞具有致病性？它們在國內雞群的分子流行情況又是如何？這些問題均有待進一步闡明。本項目擬開展國內雞群HGyV/AGV2的分子流行病學，構建HGyV/AGV2的傳染性分子克隆，拯救出HGyV/AGV2病毒；在細胞與動物水平對HGyV/AGV2的致病性進行研究。本項目的開展，不僅對明確國內雞群HGyV/AGV2的分子流行情況及其致病性具有重要的基礎理論價值，而且對進一步研究其它新型環形病毒的公共衛生意義具有重要的指導意義。
結題摘要
為明確國內雞群及人群中是否存在AGV2，首先建立了檢測AGV2的PCR方法。以TA克隆陽性質粒為模版進行的靈敏度檢測發現，該PCR擴增AGV2的靈敏度可達2.7個拷貝數。對4個不同的活禽市場共54份雞群羽囊組織樣品以及人的178份血樣樣品的檢測發現12個AGV2陽性樣品，其中10個來自活禽市場雞群，另2個來自人血清樣品。4個不同活禽市場雞群AGV2的陽性率分別為25%, 12.5%, 15.8%以及20%；人血清樣品AGV2的陽性率為1.1%。胺基酸序列分析發現，本研究檢測到的12個AGV2序列間的同源性為98.3％-100％，而與NCBI資料庫中已報導的AGV2序列的同源性在92.2％-99.1％。值得注意的是，這12個AGV2序列與NCBI中AGV2原型株Ave3以及國內人源株China的相應序列的同源性分別僅為92.2％-93％以及93%–93.9% ，而與檢測於人及雪貂的CL33，G13和915F06007相應序列的同源性達99.1％。進化樹進一步分析發現，國內檢測到AGV2可以分為兩個分支。另外，在一腫瘤發病雞群的診斷與檢測中發現，AGV2與CAV以及MDV存在共感染。為拯救AGV2病毒，從臨床AGV2陽性樣品中，通過PCR方法擴增出AGV2全基因組，分別構建了單拷貝和雙拷貝AGV2全基因組傳染性克隆。通過間接免疫螢光方法證明單拷貝AGV2全基因組成功表達AGV2衣殼蛋白VP2和VP3的基礎上，利用MSB1和HD11細胞對單拷貝和雙拷貝兩種AGV2全基因組傳染性克隆嘗試了病毒拯救。為開展AGV2血清學檢測，本項目利用構建的AGV2的VP1、VP2、VP3蛋白原核表達產物，並製備了抗AGV2 VP2以及VP3的小鼠多克隆抗體。另外，為探究AGV2的VP3蛋白中可能的潛在磷酸化位點對AGV3 VP3凋亡功能影響，在預測AGV2 VP3蛋白中4個潛在磷酸化位點的基礎上，進行了真核表達載體的構建，並評價了這4個潛在磷酸化位點對AGV2 VP3凋亡功能的影響。發現單個磷酸化位點不影響AGV2 VP3蛋白的定位及其凋亡功能。這些研究成果與發現不僅為進一步開展AGV2流行病學調查、探究AGV2相關疾病、而且為揭示AGV2關鍵蛋白VP1、VP2、VP3功能提供了材料，打下了基礎。
