己糖激酶法

己糖激酶是六碳糖的磷酸化酶，催化使葡萄糖從穩定狀態變為活躍狀態，活化一個葡萄糖需要消耗1個ATP，一個ATP放出一個高能磷酸鍵，大約放出30.5kj自由能，大部分變為熱量而散失，小部分使磷酸與葡萄糖結合生成葡萄糖-6-磷酸。

在己糖激酶催化下，葡萄糖和ATP發生磷酸化反應，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸內酯，同時使NADP還原成NADPH。反應式如下：

根據反應方程式，NADPH的生成速率與葡萄糖濃度呈正比，在波長340nm監測吸光度升高速率，計算血清中葡萄糖濃度。

基本介紹

• 外文名：hexokinase，HK

基本信息

在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷腺苷(adenosine triplcosphate，ATP)發生磷酸化反應，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與二磷酸腺苷(adenosine driplcosphate，ADP)。前者在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP)，同時使氧化型輔酶Ⅰ(NADP)還原成還原型輔酶Ⅰ(NADPH)反應式如下：葡萄糖+ATP→G-6-P+ADP;G-6-P+NADP→6-GP+NADPH+H。

根據反應方程式，NADPH的生成速率與葡萄糖濃度呈正比，NADPH在340 nm有特異吸收峰，在波長340 nm處監測吸光度升高速率，計算血清中葡萄糖濃度。

過程

酶餛合試劑的成分與濃度

根據試劑盒說明書復溶後，混合配製成酶試劑，置棕色瓶中放冰櫃保存，約可穩定7天。

2．5mmol/L葡萄糖標準套用液

手工操作

1．速率法測定(以半自動分析儀為例)

(1)主要參數 (2)加樣；37℃預溫酶混合試劑1000μ1，加血清20μ1，立即吸入自動分析儀，監測吸光度升高速率(△A/min)。

(3)計算

2．終點法測定：取16mmXl00mm試管，按下表編號與操作。

以上各管充分混勻，在37℃水浴，準確放置10min，分光光度計波長340nm、比色杯光徑10mm，用蒸餾水調零，分別讀取各管吸光度(Au、Ac、As、AB)。

計 算

參考值

空腹血清葡萄糖為3.89—6.1lmmol/L(70一110mg/dl)。

附註

1．己糖激酶方法的特異性比葡萄糖氧化酶法高，是目前公認為測定血糖的參考方法，適用於自動分析儀。輕度溶血、脂血、黃疽、維生素C、氟化鈉、肝京、EDTA和草酸鹽等不干擾本法測定．因為從紅細胞釋放出的有機磷酸酯和一些酶能消耗NADP，故干擾本法測定。

2．雖然根據NADPH的摩爾吸光度可以直接計算血清葡萄糖濃度(如Boehringer、Roche等試劑盒)，但建議最好同時測定標準管和空白管(蒸餾水代替血清)。此時計算公式應為：