基本介紹
- 書名：大鼠致畸實驗
- 作者：中國醫科大學
- ISBN：ISRCCNM220300820
- 定價：48元
- 出版社：人民衛生出版社
- 出版時間：2003年8月
- 裝幀：精裝
- 開本：32開
簡介,實驗操作,
簡介
本片為"十五"國家重點音像出版規劃品種、衛生部醫學視聽教材。大鼠致畸實驗是重要的藥物毒性實驗，本實驗用時長，操作複雜，教學中無法作示教；本片詳細介紹大鼠致畸實驗的目的、原理、器材、實驗方法和結果觀察，對教學和科研有比較重要的參考意義。本片影像清晰，內容豐富，片長36分鐘。本片由中國醫科大學製作，適合醫學生自學、醫學院校教學以及科研人員參考使用。
實驗操作
1、動物選擇致畸試驗中動物應選擇，食性和對受試物代謝過程與人類接近，體型小、馴服、容易飼養和易繁殖及價廉外，還應特別注意妊娠過程較短、每窩產仔數較多和胎盤構造與人類接近的動物。
致畸試驗可選用二種哺乳動物，一般首先考慮大鼠，此外為小鼠或家兔。大鼠受孕率高，易於得到足夠標本數，而且大鼠對大多數外源化學物代謝過程、基本與人類近似。但不足之處是大鼠對一般外源化學物代謝速度很高，對致畸物耐受性強、易感性低，有時出現假陰性結果。例如,錐蟲藍可以干擾大鼠卵黃囊胎盤對胚胎的正常營養過程而導致畸胎，出現陽性結果。而人類胎盤不具有卵黃囊胎盤階段，所以有時此種結果對人類為假陽性。
小鼠自然畸形發生率較大鼠高。對形成齶裂的致畸物更較為敏感。家兔為草食動物，與人類代謝功能差異較大，妊娠期不夠恆定，自然發生率也較高。雞胚也可進行致畸試驗，可同時得到大量雞胚，胚胎髮育條件也較易控制。但雞胚不是哺乳動物，缺乏受試物與母體的相互作用。
2、劑量分組致畸試驗中劑量分組是極為關鍵與複雜的問題。在確定劑量時，一方面要求找出最大無作用劑量以及致畸閾劑量；同時還要保持母體生育能力，不致大批流產和過多胚胎死亡和避免母體死亡。一般應先進行預試。預試的目的是找出引起母體中毒的劑量，一般用孕鼠8～10隻，在妊娠5～16天內給予受試物。如出現較嚴重的母體中毒、流產或胚胎大量死亡，將劑量略為降低，直到找出引起母體輕度中毒一般症狀的劑量。根據預試結果進一步確定正式試驗劑量。
正式試驗最少應設3個劑量組，另設對照組。如受試物溶於某種溶劑中給予動物，則另設溶劑對照組。有時為了更好地驗證試驗結果，另設陽性對照組。原則上，最高劑量組該劑量一般不超過LD50的1/5-1/3，應引起母體輕度中毒，即進食量減少、體重減輕、死亡不超過10%；最低劑量組可為LD50的1/100～l/30，不應觀察到任何中毒症狀，；中間劑量組可以允許母體出現某些極輕微中毒症狀，其劑量與高劑量和低劑量成等比級數關係。最高劑量組能引起母體輕度中毒，仍未觀察到致畸作用，則可確認為該因素不具有致畸作用。如已掌握或能估計人體實際接觸量，也可將實際接觸量作為低劑量，並以其10倍左右為最高劑量。凡急性毒性較強的受試物，所採用劑量應稍低，反之可較高。
致畸試驗的分組可因試驗目的不同而有所變化。如欲觀察劑量效應（反應）關係，則設計劑量組數適當增加。
3、動物交配處理將性成熟雌雄動物按雌雄1:1或2:1的比例同籠交配。每日將已確定受孕雌鼠隨機分入各劑量組和對照組。確定受孕方法是陰栓檢查或陰道滌片精子檢查，出現陰栓或精子之日即為受孕“0”日，也有人作為第l日。
接觸受試物的方式與途徑應與人體實際接觸情況一致。對於外源化學物，一般多採用灌胃方式給予。在特殊情況下，也可採用腹腔注射法，效果與經口近似。大鼠和小鼠一般可自受孕後第5天開始接觸受試物，每日一次，持續到第15天。如欲研究器官易感性，則應在上述期間增加動物組數，將受試物每日分別給予不同組的動物，根據畸形出現的情況，確定受試物的敏感時間和靶器官。
試驗期間每天稱取母鼠體重。根據體重增長，隨時調整劑量，觀察受孕動物的妊娠情況和胚胎髮育情況。受孕動物的體重如持續增長，則表示妊娠過程及胚胎髮育正常。
4、胎仔檢查自然分娩前1～2日將受孕動物處死剖腹，取出子宮及活產胎仔，記錄死胎及吸收胎。一般大鼠在受孕後第19～20天，小鼠第18～19天，家免在第29天。胎仔在臨近出生期間，發育進展極為迅速。相差半日，發育情況即有顯著差異，骨骼發育尤為顯著。
孕鼠處死後，從子宮頂端依次取出其中活產幼仔、死胎以及吸收胎，並記錄編號。大鼠和家免還應取出卵巢，記錄黃體數用來代表排卵數。活產胎仔取出後，先檢查性別，逐只稱重，並按窩計算平均體重，然後由下列幾方面進行畸形檢查：①外觀畸形肉眼檢查，例如露腦：②肉眼檢查內臟及軟組織畸形，如齶裂；③骨骼畸形檢查，例如顱頂骨缺損等。畸形檢查只限活產胎仔。一般可將活產胎仔進行肉眼檢查，然後將其中2/3經過固定、透明和茜素紅（alizarinred）染色等步驟，觀察骨骼畸形。另外經鮑音氏（Bouin）
5、結果評定致畸試驗結果的評定，主要是計算畸胎總數和畸形總數。畸胎總數：每一活產幼仔出現一種或一種以上畸形均作為一個畸胎；畸形總數：在同一幼仔每出現一種畸形，作為一個畸形。如出現二種或二個畸形，則作為二個畸形計，並依此類推。
6、致畸物以及發育毒性作用物危險度評定對於致畸物危險度及致畸作用機理尚未充分闡明。評定方法方法較多。雖然各有一定的根據，但都具有一定的經驗性質，而且缺乏大規模的實際驗證。現擇要介紹幾種，供實際工作中參考。
（l）歐洲經濟共同體(EEC)和經濟合作與發展組織(OECD)建議的致畸物分級標準，可簡稱EEC和OECD致畸物分級標準。
（2）致畸指數：母體LD50與胎仔最小致畸作用劑量之比,這一比值愈大，致畸作用愈強，一般認為比值10在以下者，不具致畸作用，10～100具致畸作用，100以上致畸作用強烈。
（3）相對致畸指數（RTI）：成年動物最小致死劑量（LD01）與引起5%活產胎仔出現畸形的劑量（tD50）之比值。
（4）母體毒性與發育毒性比值：即對母體最低損害作用劑量(A)與胎仔最低損害作用劑量(D)之比(A/D)。一般認為A/D比值≥3，具有發育毒性危險性。比值越大，危險性越高，≤3者，相對危險性較低或不具危險性。
利用V/D比值評定某一外源化學物或其它環境有害因素致畸危險性時，還可將人體實際接觸的劑量考慮在內。有人提出、A/D比值中母體最低損害作用劑量的測定，應在妊娠動物進行，否則不夠精確。
