基因診斷技術

基因診斷技術

根據臨床症狀套用分子遺傳學方法,抽取檢測患者遺傳物質的結構或表達水平的變化,可以輔助臨床診斷的技術,稱為基因診斷(gene diagnosis),又稱為分子診斷(molecular diagnosis)。

基本介紹

  • 中文名:基因診斷技術
  • 外文名:gene diagnosis
  • 屬性:基因診斷
  • 性質:技術
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基本技術

特點

針對直接病因診斷
特異性強,靈敏度高
適應性強,診斷範圍廣
目的基因是否處於活化狀態均可,無組織和發育特異性
在感染性疾病的基因診斷中,可檢測正在生長的病原體或潛伏病原體

樣本

可以是任何有核細胞,包括:
1.外周血白細胞、口腔黏膜細胞
2.活檢標本、石臘包埋的組織塊
3.沉澱細胞(唾液、痰液、尿液)
4.羊水細胞、絨毛細胞、 進入母體循環的胎兒細胞
(套用PCR,樣本可微量化到一個細胞)

前提

被檢測基因是否已在染色體上定位;
被檢測基因結構是否明確;
被檢測基因已知的突變類型;
被檢測基因有無緊密連鎖的 DNA多態標記;
被檢基因的功能及其在疾病發生髮展中的作用

步驟

步驟步驟

內容

基因突變的檢測
基因連鎖分析
基因表達的分析

診斷基本技術

①核酸分子雜交
②聚合酶鏈反應
③連線酶鏈反應
④DNA測序
⑤基因晶片技術

核酸雜交

是從核酸分子混合液中檢測特定大小的核酸分子的傳統方法。核酸雜交反應是一對一的反應,即膜上有一個被檢測分子時,相應就有一個標記的探針分子與它雜交。其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復後又可依鹼基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot)、RNA印跡雜交(Northern blot)、點雜交和原位雜交。

聚合酶鏈反應

用聚合酶鏈反應來擴增靶分子以特異性地增加靶分子量,達到提高敏感性的目的。

DNA測序

目前在實驗室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一種單鏈的DNA模板或經變性的雙鏈DNA模板和一種恰當的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用單鏈的DNA模板,合成出準確互補鏈,在合成時,某種dNTP換成了ddNTP(2′,3′-雙脫氧核苷三磷酸),這時,DNA聚合酶使ddNTP滲入到寡核苷酸鏈的3′末端,導致無3′-OH的核苷酸無法繼續與其他核苷酸連線而終止了DNA鏈的生長。雙脫氧核苷酸的種類不同,摻入的位置不同,就造成了在不同的位置終止的長度不等的互補鏈。通過摻入的放射性核苷酸結合聚丙烯醯胺凝膠電泳,即可讀出模板DNA的互補鏈序列。

基因晶片技術

基因晶片技術是近年來發展十分迅速的大規模、高通量分子檢測技術。其基本原理是核酸雜交,其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針,有規律的排列固定於支持物上,形成矩陣點。現在的技術可以做到在25px2上排列成千上萬個“點”。樣品DNA/RNA通過PCR擴增、體外轉錄等技術摻入螢光標記分子,然後按鹼基配對原理進行雜交,再通過螢光檢測系統等對晶片進行掃描,並配以計算機系統對每一探針上的螢光信號做出比較和檢測,得出所要的信息。

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