土壤DNA提取試劑盒

土壤的成分包括礦物質、粘土等無機物、植物及植物的遺體、腐殖物質等土壤有機物以及在土壤中存在的微生物。

提取的難點

從土壤中提取的DNA，是微生物、動植物遺體等的總DNA，同時，腐殖物質的性質與DNA很相似，DNA提取過程中會將腐殖等物質一起純化，採用傳統的DNA提取方法來除去腐殖物質等抑制因子是十分困難的。而這些腐殖物質會抑制聚合酶鏈式反應（PCR）及限制性酶切等。因而，從土壤中提取DNA，腐殖物質等抑制因子的除去乾淨是重中之重。某公司根據腐殖物質等特點，發明了高效的腐殖酸吸附劑，再與矽膠柱純化的技術結合，開發出了高效土壤DNA提取試劑盒（SoilDNAKit），已為廣大客戶所採用，完全能夠替代價格昂貴的進口產品。

原理與操作

土壤樣品加入懸浮緩衝液Buffer C1，並加入玻璃珠與專利的腐殖酸吸附劑Buffer C2，渦旋使土壤充分重懸，腐殖物質充分釋放，讓吸附劑有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液Buffer C3並渦旋在玻璃珠的摩擦作用下，裂解土壤中的所有生物包括G+細菌、酵母菌、真菌、藻類、線蟲甚至真細菌的孢子、芽孢、動植物遺體等，游離DNA。之後，再加入沉澱劑Buffer C4，離心沉澱除去土壤殘渣、吸附有腐殖酸的吸附劑、多糖多酚、絕大部分的色素等，獲得清亮的、含有DNA的上清，上清加入異丙醇沉澱獲得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解後，再加入Buffer C5離心進一步除去腐殖酸等雜質，獲得上清，往上清加入乙醇後轉移到矽膠純化柱中過柱吸附DNA，除去雜質。再加入漂洗液Buffer WB離心進一步除去蛋白質、腐殖酸等雜質，加入漂洗液DNA Wash Buffer除去鹽分等。乾燥柱子後加入滅菌去離子水後，離心獲得高純的DNA。

試劑盒組成

產品編號	D8101	D8105	D8106
次數	5	50	100
純化柱子	5	50	100
收集管	5	50	100
Buffer C1	4ml	39ml	80ml
Buffer C2	700μl	6 ml	12ml
Buffer C3	700μl	6 ml	12ml
Buffer C4	700μl	10ml	16ml
Buffer C5	2 ml	20 ml	37 ml
Glass Beads	2g	20g	40g
Buffer WB	3ml	30 ml	55 ml
DNA Wash Buffer	2ml	20 ml	2x20 ml
說明書	1	1	1

套用實例

腐殖酸吸附劑使用效果比較：

Buffer C2為獨特的腐殖酸吸附劑，在裂解時加入Buffer C2。左圖，為樣品裂解後離心獲得的上清，加有Buffer C2的裂解液明顯顏色淺很多。

1,2：裂解時加有Buffer C2

3,4：裂解時不加Buffer C2

裂解液加Buffer C4進一步沉澱除雜效果：

上一步獲得的裂解液上清加入Buffer C4進一步處理，沉澱離心除雜，裂解時加有Buffer C2(腐殖酸吸附劑）的，再經Buffer C4處理幾乎不再有染色，而不加Buffer C2的顏色還很深。

1,2：裂解時加有Buffer C2

3,4：裂解時不加Buffer C2

左圖為不同樣品的土壤樣品用不同方法所提的DNA

土壤DNA&amp

1, 2: SDS高鹽酚氯仿抽提法
3, 4: 使用Soil DNA Kit提取
1, 3: 為花基土壤
2, 4: 河邊淤泥

用傳統法提取的DNA，拖尾嚴重，無明顯的主帶，能看到明顯的腐殖酸等。而用soil DNA Kit所提的，主帶明顯。

左圖為上面對應的DNA同一片段PCR擴增後電泳圖

土壤DNA soil DNA

1,2：SDS高鹽酚氯仿法抽提的DNA模板擴增效果
3,4：用Soil DNA Kit提取的DNA模板擴增效果
1, 3: 為花基土壤
2, 4: 河邊淤泥