含蛋白多糖

研究黃芪多糖對腦出血大鼠腦組織含鐵血紅素氧合酶1(HO1)蛋白表達及含水量、超微結構的影響。方法139隻雄性SD大鼠隨機分為假手術組、腦出血組與黃芪多糖治療組。

簡介

採用Ⅶ型膠原酶誘導法製作SD大鼠腦出血模型，假手術組以等量生理鹽水代替Ⅶ型膠原酶;黃芪多糖治療組給予黃芪多糖25mg/kg腹腔注射，每天1次，直至處死。分別於腦出血後12h、24h、2d、4d、7d5個時間點對各組大鼠進行神經行為學評分，測量腦組織含水量和用免疫組化法檢測HO1蛋白表達，透射電鏡觀察腦出血後4d血腫周圍神經元的超微結構。結果腦出血組與黃芪多糖治療組大鼠腦出血後腦組織HO1表達以及腦組織含水量較假手術組顯著增高(均P<0.01)；腦出血後12hHO1蛋白即有表達,2d達高峰,爾後逐漸下降。黃芪多糖治療組與腦出血組比較，HO1表達的變化相同,但各時間點表達均高於腦出血組（P<0.05～0.01）；腦組織含水量各時間點均顯著降低（P<0.05～0.01）；4d、7d時大鼠神經行為學評分明顯減少(均P<0.01)，神經元超微結構病理改變輕。結論黃芪多糖可促進腦出血後腦組織HO1的表達,這可能是其減輕腦出血後腦水腫和腦組織損傷的機制之一

相關資料

靈芝多糖的提取

近年來，藥理學和免疫學的多方研究表明，靈芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有廣泛的藥理活性，排毒、抗放射，提高肝臟、骨髓合成dna、BNA的能力，抗腫瘤增強機體免疫等效果。因此多糖的提取為廣大科研人員藥研製者所重視，他們不斷研究和探索靈芝多糖提取的方為弄清靈芝多糖的化學成分提供有力的理論依據，同時為許多疾病患者帶來福音。
一、靈芝茵絲體多體

(一)材料：糖的提取

1．菌種：湖南省食用菌研究所提供的韓國靈芝母種。
2．種子培養基：玉米粉2%大米粉2%
蔗糖2%磷酸二氫鉀o.1g
硫酸鎂0.05%ph值自然
3．發酵培養基：麥麩浸出液10%葡萄糖2%
硫酸銨0.2%
磷酸二氫鉀0.2%ph值自然

(二)方法
1．種子培養：
2．發酵培養生產菌絲體。
3．測定乾、濕菌絲體。
將發酵液進行離心，然後取其沉澱物，加人60%蔗糖，進行高速(3000轉/分)密度梯度離心5分鐘，取上層菌絲體，洗淨蔗糖再壓乾，即得濕菌體，然後再將濕菌體於高溫下烘乾即為乾菌體。分別稱取其重量。

4．多糖的提取。
(1)菌絲體預處理。取適量的靈芝濕菌體，用乙醇等有機溶劑進行處理，以除去濕菌體中的脂類物質，同時使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

(2)用熱水提取多糖。取上面經預處理的靈芝濕菌體，放人1：20的熱水(95℃)中浸提，一次3小時，連續浸提3次，合併3次的水浸提液減壓、濃縮至一定體積，再用3倍體積的95%乙醇混合，靜置10－12小時，再離心，最後加入75%的乙醇反覆洗滌，以沉澱多糖。此沉澱物為粗多糖，其中混雜有蛋白質、色素、低聚糖等小分子雜質，一般要經過純化。

(3)多糖的純化，去蛋白質和deae纖維素柱層析。去蛋白質一般採用sevag法：加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振盪半小時進行分離，直至氯仿與水的界面無沉澱為止，且要重複處理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白質。多糖純化一般採用硼酸型deae纖維素柱層析法：取脫蛋白後的多糖，分別以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氫氧化鈉溶液進行洗脫，然後用0.2%恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，再濃縮脫鹽即得所需的多糖。

(4)多糖純度的鑑定。
可用電泳法進行鑑定，如果存在單一帶，說明為純多糖。

5．多糖與多糖中蛋白質含量的測定：
取一定量菌絲體粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脫去蛋白考馬斯亮蘭法測其粗多糖中蛋白質和多糖的含量。測得菌絲體中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白質含量2.16%。

二、靈芝子實體多糖的提取

(一)材料
1．菌種：韓國靈芝栽培種。
2．子實體栽培生產料：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，
石膏1%，ph值自然。

(二)方法
1．子實體栽培。
2．靈芝子實體預處理。
3．子實體多糖的提取。
取適量的靈芝子實體，搗碎成粉末，用80目篩過篩，然後用熱水提取法進行提取。具體操作同菌絲體多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白質等小分子雜質，也須除去。

4．去除蛋白質和色素。
子實體粗多糖去除蛋白質也採用se陰法。去除色素，目前尚未發現很理想的方法。一般用乙醇進行反覆沖洗，但效果不很理想。

5．多糖純度的鑑定。
同菌絲體多糖純度的鑑定。

6．子實體粗多糖、多糖及蛋白質含量的測定。
具體方法同菌絲體多糖及蛋白質含量的測定。測得子實體中粗多糖7.5%、多糖1.5%，蛋白質0.6%，其含量均低於菌絲體中的含量。可見菌絲體階段就形成了靈芝多糖的有效成分，為靈芝液體深層發酵生產菌絲體提供了科學依據。