三維試驗

三維試驗是利用AmpC酶可抑制頭孢西丁的原理，用凍融法或超聲粉碎法粗提細菌中的β-內醯胺酶，觀察酶粗提物對頭孢西丁的抑制情況。三維試驗是目前公認的、較為經典的檢測(去阻遏)持續高產AmpC酶的方法，也是目前檢測質粒AmpC酶最好的方法。但缺點是需增菌、破碎細菌細胞並提取酶的粗提物，操作繁瑣、費時，難以在臨床微生物實驗室常規套用。

基本介紹

• 中文名：三維試驗
• 原理：利用AmpC酶可抑制頭孢西丁的原理
• 方法：製備粗提物、三維試驗
• 性質：是目前經典的檢測AmpC酶方法

三維試驗是利用AmpC酶可抑制頭孢西丁的原理，用凍融法或超聲粉碎法粗提細菌中的β-內醯胺酶，觀察酶粗提物對頭孢西丁的抑制情況。如果粗提物中有AmpC酶存在，即可抑制頭孢西丁的活性，使其周圍對頭孢西丁敏感的大腸埃希菌得以生長；反之，大腸埃希菌受頭孢西丁的抑制則不能生長。三維試驗利用酶的粗提物而不是活菌作檢測，不受抗生素的誘導影響。
操作方法：①製備β-內醯胺酶的粗提物：增菌後收集細菌，用凍融法或超聲粉碎法破碎細菌細胞，使其菌體內的酶釋出，再離心去除細菌碎片，收集上清液，即為β-內醯胺酶的粗提物(用頭孢硝噻吩紙片確定有8．內醯胺酶的存在)。②三維試驗：將大腸埃希菌標準菌株ATCC25922按CLSI的K-B紙片擴散方法塗布在M-H平板上，在平板的中央貼一張FOX紙片，從距離紙片5 mm處用無菌刀片在平板的瓊脂上向外緣方向(離心方向)切一
裂隙，每一裂隙中加入25～30ul待檢菌株的β-內醯胺酶粗提物，35℃培養18～24h，觀察裂隙的內側端(頭孢西丁紙片的抑菌圈內)周圍有無細菌生長。
三維試驗是目前公認的、較為經典的檢測(去阻遏)持續高產AmpC酶的方法，也是目前檢測質粒AmpC酶最好的方法。但缺點是需增菌、破碎細菌細胞並提取酶的粗提物，操作繁瑣、費時，難以在臨床微生物實驗室常規套用。