he(蘇木素-伊紅染色)

蘇木素-伊紅染色（hematoxylin and eosin,HE）

蘇木素伊紅染色法是病理組織切片最經常最廣泛使用的一種常規染色法。在工作中，我們常會遇到由於種種原因需要重切重染片，此時使用一種比較簡便、可靠的快速切片染色法，以保證不拖延診斷時間，常很必要。我們使用快速蘇木素伊紅染色法，省時、實用。

基本介紹

• 中文名：蘇木素-伊紅染色
• 外文名：hematoxylin and eosin,HE
• 簡稱：HE染色

概述

蘇木素-伊紅染色，簡稱HE染色，是組織學技術的常規染色方法。恆定優質HE切片應該是紅藍相映，層次濃淡均為分明。

基本步驟

一、石蠟切片蘇木素一伊紅染色法的基本步驟：
脫蠟
（1）二甲苯I 15分鐘
（2）二甲苯II（應完全透明） 10分鐘
逐級降濃度酒精水化
（3）無水酒精I（變為不透明） 1－2分鐘
（4）無水酒精II 1－2分鐘
（5）95% 酒精 1－2分鐘
（6）80% 酒精 1－2分鐘
（7）自來水洗 片刻
染色
（8）蒸餾水 片刻
（9）蘇木素液染核 10—15分鐘
（10）自來水洗 片刻
（11）1%鹽酸酒精分化 0.5—1分鐘
（12）流水沖洗 片刻至數小時
（13）碳酸鋰飽和水溶液反藍 1分鐘
（14）流水沖洗 15分鐘至數小時
（15）復染 0．5%伊紅水溶液（對比染色） 2—5分鐘
逐級升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90%酒精）
（16）自來水洗（分化伊紅） 片刻
（17）95%酒精I 1－2分鐘
（18）95%酒精 II I—2分鐘
（I9）無水酒精 I 1—2分鐘
（20）無水酒精II l－2分鐘
透明
（21）二甲苯I 5—10分鐘
（22）二甲苯II 5—10分鐘
可作透明度試驗：在黑色背景下以光線照於切片如果見有乳白色斑片系脫水不足，需
再行脫水。
封固
（23）蓋玻片下封固
結果：胞核呈藍色，胞漿呈紅色，紅細胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色。

染色過程中的加熱

為了縮短某些程度的染色時間，通常可用加熱的方法來實現。一般是將切片或塗片浸在染色液內，連同染色皿置於37℃或56℃溫箱內至所需時間。
有的染色需用煮沸或近於煮沸的技術，可將染色液在試管內煮沸後傾在載玻片上；或在注滿染液的載玻片下面直接加熱，直接加熱會因溶劑蒸發而使染色劑發生沉澱。這可在傾人染色劑以前在切片上覆蓋一塊方形濾紙束加以防止。染色完成後沖洗切片時可以很容易地除掉濾紙而又不會損傷切片。

染色時應注意事項

一張優質的HE染色切片，絕非僅指染色而言，它包括很多方面，首先應重視“固定”環節，其次注意脫水、透明、組織浸蠟，包埋和切片等各個步驟。一張因固定、脫水等步驟有所缺陷的切片，染色是不可能鮮艷、透明、層次分明的。解決上述各細節問題的方法已在前面各章節中均提到過。

但在進行HE染色時還應注意以下問題：
1．組織切片的脫蠟步驟應徹底，否則無論進行那種染色都會發生困難。脫蠟時間要充分，若溶蠟劑使用過久應及時更換以免效率降低，若室溫過低，可將溶蠟劑置於溫箱中進行脫蠟。
2．蘇木素染液使用一段時間後表面易出現亮晶狀飄浮物，這可能是液體表面的過氧化物，必須過濾除去，以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過三、四百張切片後，著色力會減弱，著色不鮮艷，呈灰藍色時應及時更換新液。
3．染色的時間長短需依據：染劑對組織的染色作用，室溫條件，切片厚薄，固定液的類別，染液的新舊而進行調節。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。
4．分化十分重要。分化步驟的準確也是染色成敗的關鍵，若分化失當則必然引起染色不勻或過淡，過深等現象，因此分化後一定要鏡檢，觀察胞核是否清晰，胞漿呈淡白色。否則需再次分化，不然一旦復染後，組織會呈紫藍色即“藍蓋紅”現象。
5．還原液不宜過濃，若鹼性太強易使組織脫落故以淡為宜。
6．伊紅宜淡染，復染過深胞核會不清晰，影響鏡檢。
7．若脫水，透明等步驟不夠徹底，則組織表面會有一層霧狀膜。若有這一現象，應立即更換純酒精脫水，再次透明。在潮濕的季節里應注意酒精的濃度、若降低要及時更換。
8．染色後的組織切片、要將組織四周的污染物痕跡擦掉，以免影響美觀。
9．封固劑要適量，滴加時應小心傾滴，蓋玻片要輕輕放置，以免氣泡產生影響鏡檢。蓋玻片大小選擇要合適，一般要大於組織塊，以防封蓋不全，蓋玻片要放正，標籤貼牢，編號清楚。從而保證切片的封藏和美觀。
10．染好的切片應妥為保存，更應避免日光照射，否則切片容易褪色。