Xho I

Xho I是一種經基因工程改造的快速限制性內切酶，可特異性識別5'-C▼TCGAG-3'序列並在C與TCGAG之間形成粘性末端。該酶在分子克隆、限制性片段長度多態性分析及Southern印跡等技術中發揮重要作用，其活性最佳溫度為37°C，配套緩衝液含示蹤染料可直接用於電泳分析。Xho I對CpG甲基化敏感，在-20°C條件下可穩定保存兩年。

基本介紹

• 識別位點：5'-C▼TCGAG-3'  
• 反應溫度：37°C 
• 緩衝體系：通用/彩色緩衝液 
• 同裂酶：PaeR7I/Sfr274I/Sla I  
• 儲存條件：-20°C（2年） 
• DNA處理量：1μg/15分鐘

酶學特性

Xho I切割DNA形成的粘性末端為5'-TCGA突出端，其互補鏈切割位點位於3'-GAGCT▲C序列間。該酶對CpG位點的甲基化敏感，當識別序列中的胞嘧啶發生甲基化修飾時，酶切活性將受到顯著抑制。

與HindⅢ等限制酶相比，Xho I識別序列在基因組中出現機率較低，這種特性使其在基因定位分析中具有獨特優勢。實驗數據顯示，該酶在λDNA中存在至少3個有效切割位點。

反應體系

標準反應體系包含1μL Xho I（10U/μL）、2μL 10×緩衝液及1μg DNA模板，總體積控制在20μL以內。配套緩衝液分為兩種類型：

• 通用緩衝液（10× Buffer）適用於單一酶切反應
• 彩色緩衝液（10× Color Buffer）含紅色/黃色示蹤染料，紅色染料遷移速率與2500bp DNA片段相當，黃色染料對應10bp片段，無需額外添加Loading Buffer即可直接電泳

操作規範

進行雙酶切反應時：

• 單個酶用量不超過反應體積的1/10
• 優先添加低鹽濃度需求的酶
• 不同溫度需求的酶需分階段溫育

基因組DNA酶切建議延長反應時間至30-60分鐘，同時增加酶用量至2-3μL以提高切割效率。當處理高濃度DNA樣品（1-5μg）時，反應體系可按比例擴大至50μL，相應增加酶用量至1-5μL。

質量控制

所有批次Xho I均通過以下質量驗證：

• 在標準條件下完全消化1μg λDNA
• 無核酸外切酶污染
• 在五緩衝液系統中保持100%活性

反應體系中添加BSA可增強酶穩定性。對於超螺旋質粒，建議使用預冷緩衝液並嚴格控制反應時間在15分鐘內，以防止星號活性產生。

套用限制

Xho I僅限科研用途，嚴禁套用於臨床診斷、藥物製備及食品加工領域。實驗操作需在符合生物安全等級的實驗室進行，廢棄酶液須經121°C高壓滅菌20分鐘後處理。