UNG酶的作用原理是選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵，形成的有缺失鹼基的DNA鏈，在鹼性介質以及高溫下會進一步水解斷裂，從而被消除.UNG酶的最佳活性溫度為50℃，95℃滅活。
基本介紹
- 中文名：UNG酶
- 外文名：uracil-N-glycosylase
- 最佳活性溫度：50℃
- 滅活溫度：95℃
基本信息,作用,*UNG酶特徵,
基本信息
uracil-N-glycosylase
作用
為保證PCR結果的準確性，要預防非特異性PCR擴增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和Taq酶熱啟動。PCR反應最常見, 最重要的污染物是PCR產物,防污染熱啟動PCR試劑盒以dUTP取代dTTP，所以PCR產物都是含有dU的DNA鏈。在PCR開始前增加50℃的保溫步驟，UNG酶即可將反應體系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶鹼基降解，並在隨後變性這步的條件下DNA鏈斷裂,消除由於污染DNA產生的擴增，從而保證擴增結果的特異性，準確性。同時UNG酶被滅活,不會再降解新擴增的產物U-DNA。
高品質的UNG酶可以消除高達108的U-DNA產物，和熱啟動Taq酶一同用於建立含有UNG/dUTP防污染體系的熱啟動PCR反應系統。
*UNG酶特徵
· 克隆有Ecoli K12 Uracil-N-Glycosylase 基因的大腸桿菌經誘導表達後，再經三次過柱純化分離出來的重組蛋白。分子量25.66 KDa。
· 反應條件： 50 ℃ ，2 分鐘；反應 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT 。
