R-環技術也是檢測核酸雜交的技術。雜交後的分子可以直接在電子顯微鏡下顯示出特定的構象。
在雙鏈DNA分子部分變性的情況下，單鏈的RNA分子與相應的DNA分子中的一條鏈互補形成RNA-DNA雜種分子，同時另一條DNA單鏈向外突出形成環狀圖象，稱之為R-環，該技術由此得名。在電鏡圖象中，雙鏈區比單鏈區線條粗，很易分辨。真核生物成熟的mRNA分子與其DNA分子雜交，由於內含子順序不與mRNA互補而形成R-環，所以可用來研究真核生物基因的結構，根據R-環的數目可確定內含子的數目。
基本介紹
- 中文名：R-環技術
- 外文名：R-ring technology
- 技術：檢測核酸雜交的技術
- 顯示：直接在電子顯微鏡下顯示特定構象
- R-環：DNA單鏈向外突出形成環狀圖象
- 研究：研究真核生物基因的結構
簡介,機理,核酸分子雜交,雜交方法,
簡介
R-環技術也是檢測核酸雜交的技術。雜交後的分子可以直接在電子顯微鏡下顯示出特定的構象。
機理
在雙鏈DNA分子部分變性的情況下，單鏈的RNA分子與相應的DNA分子中的一條鏈互補形成RNA-DNA雜種分子，同時另一條DNA單鏈向外突出形成環狀圖象，稱之為R-環，該技術由此得名。在電鏡圖象中，雙鏈區比單鏈區線條粗，很易分辨。真核生物成熟的mRNA分子與其DNA分子雜交，由於內含子順序不與mRNA互補而形成R-環，所以可用來研究真核生物基因的結構，根據R-環的數目可確定內含子的數目。
核酸分子雜交
根據異源單鏈核酸分子間因結構互補發生共價鍵結合，能形成互補雜合雙鏈，而進行分子遺傳學研究的一種技術。雙鏈核酸分子加熱至80～100℃時，鹼基對之間的氫鍵斷開，形成兩條單鏈，這一過程叫作核酸的變性作用或解鏈。變性的核酸分子慢慢冷卻，互補的鹼基對之間又會重新形成雙鏈分子，這一過程叫作核酸的復性作用或退火。核酸分子在pH〉10和pH〈3的環境中也會變性，當條件適合時又可復性。核酸分子雜交技術是基於核酸變性與復性的原理。
利用核酸雜交技術進行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素或螢光物質標記，製成探針(見核酸分子探針)，再與另一種核酸單鏈雜交。
雜交方法
核酸分子雜交有液相和固相兩種方法。液相法的核酸單鏈分子都在溶液中，通過分子運動進行雜交固相法是將一種核酸單鏈固定在不溶性的介質上。另一種核酸單鏈在溶液中與固定的核酸分子進行雜交。常用的固相介質有硝酸纖維膜、尼龍纖維膜、瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠等。
