DNA合成阻斷法

DNA合成阻斷法:選用DNA合成抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時期細胞的運轉,最終可將細胞群阻斷在S期或G1/S交界處。羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度AdR(脫氧腺苷)、GdR(脫氧鳥苷)和TdR,均可抑制DNA合成,使細胞同步化。

其中高濃度TdR對S期細胞的毒性較小,因此常用TdR雙阻斷法誘導細胞同步化:在細胞處於對數生長期的培養基中加入過量TdR-(Hela細胞系,2mol/L;CHO細胞系,7.5mol/L),S期細胞被抑制,其他細胞繼續運轉,最後停在G1/S交界處,棄去TdR,洗滌細胞並加入新鮮培養液,細胞又開始分裂。當釋放時間大於Ts時,所有細胞均脫離S期,再次加入過量TdR,細胞繼續運轉至G1/S交界處,被過量TdR抑制而停止。該方法的優點是同步化程度高,適用於任何培養體系,可將兒乎所有的細胞同步化。缺點是產生非均衡生長現象,個別細胞體積增大。

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