細菌先經鹼性染料結晶染色，而經碘液媒染後，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），後者為革蘭氏陰性菌（G—）。
基本介紹
- 中文名：革蘭氏陽性厭氧菌
- 外文名：gram-positive anaerobic bacterium
- 等電點：PH2-3
- 測試試劑：丙酮酒精
- 作用：將細菌分為革蘭氏陽性或陰性
染色法簡介,原理,試劑,操作,臨床意義,附言,
染色法簡介
為觀察方便，脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。
原理
革蘭氏染色目前有三種觀點：等電點學說、化學學說和滲透學說。
等電點學說
革蘭氏陽性菌的等電點在PH2-3，比陰性菌（PH4-5）低，加之碘為弱氧化劑，可降低革蘭氏陽性菌的等電點，致使兩類菌的等電點差異擴大，因此陽性菌和鹼性染料的結合力比陰性菌更強。
化學學說
碘液在菌體內與結晶紫結合後又和菌體核心糖核酸鎂鹽-蛋白質複合物結合，此結合物不易被丙酮酒精脫掉，呈革蘭氏染色陽性。因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽，故對碘與結晶紫結合物攝取少，且不牢固，易被丙酮酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
滲透學說
乙醇使陽性菌所含粘肽多糖脫水而致細胞壁間隙縮小，通透性降低，在菌體內保留了染料-碘複合物，呈紫色。陰性菌含粘肽少，細胞壁變化不大，通透性不受影響，菌體內的染料-碘複合物較易透出，失去紫色，被復染成為紅色。
試劑
Crystal violet(結晶紫)、Gram Iodine(碘液)、Decolourizer（丙酮酒精）、Safranin（稀釋沙黃）
操作
1．標本處理：（1）.有菌部位的標本，如痰液、糞便、各種拭子、創面等可直接塗片。
（2）.無菌部位的標本，如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關節液等，應取適量標本（最高可達5-7ml）,經3000rpm 離心10min.，取沉渣塗片染色。
2．塗片製作：菌液塗片時，用接種環沾取菌液點在載玻片上，標本可直接在玻片上塗布；菌落塗片時，先取生理鹽水一滴，置玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中塗布。製作的塗片應自然乾燥，並經火焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細菌形態改變。將固定後的塗片進行染色。
3． 染色方法：
（1）.加上Crystal violet(結晶紫)後，染色3-5秒或更久，之後用自來水沖洗之。
（2）.加上Gram Iodine(碘液)後染色3-5秒或更久，之後用自來水沖洗之。
（3）.以Decolourizer（丙酮酒精）脫色約5-10秒，並用自來水沖洗之。
（4）.加上Safranin（稀釋沙黃）後，染色3-5秒或更久，之後用自來水沖洗之。
（5）.吸乾或在空氣中涼乾後，置油鏡鏡檢。
4．結果觀察：紫色為革蘭氏陽性，紅色為革蘭氏陰性。
[報告方式]：革蘭氏染色：檢出革蘭氏陽性球菌 ；革蘭氏陰性球菌
檢出革蘭氏陽性桿菌 ；革蘭氏陰性桿菌
[注意事項]：
1．標本塗片不能太厚，嚴格按操作要求進行。
2．玻片通過火焰溫度不能太高。
3．若塗片較厚，應延長脫色時間，直至不在出現紫色為止。
臨床意義
通過革蘭氏染色，將細菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，便於臨床治療。
附言
1 沙黃（番紅）Safranine T [C20H19ClN4=350.85]
紅棕色粉末；鹼基性染料。在水中溶解，在乙醇中易溶。
2 碘液配製：0.01mol/l碘液——稱取1.3g碘，置於50mol燒杯中，加入2.5g碘化鉀及25毫升蒸餾水，不斷攪拌之，使其溶解均勻。再加0.2mol濃鹽酸(體積質量1.19g/cm3)，再加蒸餾水稀釋到1000mol。溶液應貯藏在棕色試劑瓶中，儲於低溫暗櫥內。有效期為一個月左右
革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細胞壁的特徵為有一層out member 與陽性菌種不同。目前對大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標外，很多分子生物學方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當作實驗宿主
