雷射顯微鏡

雷射顯微鏡

雷射顯微鏡(CLSM)由共聚焦顯微鏡和飛秒紅外雷射器Verdi/Mira兩部分組成,是光學顯微鏡與現代雷射技術,高靈敏探測技術,掃描控制技術以及微機圖象處理技術,螢光及標記技術的結合。CLSM為生命科學開拓了一條觀察生命活細胞的結構及特定分子、離子生物學變化的新途徑,成為分子細胞生物學,神經科學,藥理學,遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具。

優點:,套用領域:,

優點:

  1. 螢光標記的特異性及可定量性。
  2. 共聚焦針孔的運用,有效的消除了焦平面上下散射光,提高軸向解析度。
  3. 點光源雷射的套用,對螢光素能達到有效的激發,激發的特異性高,降低對螢光的淬滅,增強側向解析度。
  4. 雙光子的套用,相對較低平均功率的紅外激發,大大減低對活細胞的損傷;螢光激發高度聚焦在焦點處,可避免了焦點以外的光漂白(Photobleaching)和光毒(cytotoxicity)作用,延長觀察時間,是目前用於活細胞跟蹤的最理想方法。
  5. 脈衝雷射散射和吸收程度小,透射性強,對厚樣品的穿透可達400um,是對厚的組織分析的最首先方法。
  6. 結合META新技術,尤其對螢光蛋白成像具有更方便,更精確的效果。

套用領域:

共聚焦及雙光子在現代生物學研究中有如下套用:
  1. 多色螢光成像(Multi-color imaging),具有多磁軌和雙向掃描,曲線掃描等特性。
  2. 三維重構(Three dimentional reconstruction)及定量分析。
  3. 實時成像(Time series,real time imaging),可進行活細胞跟蹤。
  4. 離子成像(Ion imaging)/比率成像(Ratio imaging),可進行Ca2+,Mg2+,H+,Na+,K+,Zn2+,Ni2+,Fe2+,Hg2+,Pb2+及Cd2+等成像。
  5. 螢光原位雜交(FISH:fluorescence in situ hybridization);
  6. 螢光漂白恢復(FRAP:fluorescence recovery after photobleaching);
  7. 螢光共振能量轉移(FRETM:fluorescence resonance energy transfer;
  8. 光生命期成像顯微術(FLIM:fluorescence lifetime imaging microscopy)。
  9. 螢光相關光譜(FCS:fluorescence correlation spectroscopy)。

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