胎盼藍染色

胎盼藍染色是一種基於細胞膜完整性差異檢測細胞活力的生物學技術,又名錐蟲藍、曲利苯藍(CAS號72-57-1),屬於偶氮類酸性染料。其原理為死細胞或垂死細胞因膜結構破損使台盼藍透入顯色,活細胞因膜屏障作用保持拒染狀態,類似原理的染料包括伊紅Y、苯胺黑。該方法常規用於細胞活性評估、病毒檢測及哺乳動物組織活體染色(如腎小管著色)。

實驗採用台盼藍染色液(0.4%母液經PBS稀釋),推薦終濃度0.1%與樣本1:1混合,染色時間控制在10分鐘內。鏡下活細胞呈透明狀,死細胞顯藍色,通過血球計數法計算活細胞百分比。需注意染色逾時可能導致活細胞異常著色,高濃度染料易致死細胞破裂,建議存活率>80%時優先使用螢光核酸染料。該方法已套用於植物耐鹽性研究及結直腸癌類器官增殖效率評估等生物學領域。

基本介紹

  • 中文名:胎盼藍染色
  • 類型:細胞活力的檢測方法
  • 注意事項:染色時間不宜過長等
  • 作用:可以鑑別死細胞和活細胞
染料配製:4%的胎盼蘭母液,稱取4g胎盼藍,加入少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4℃保存。使用時用PBS稀釋至0.4%。
操作步驟:a 製備單個細胞懸液,並做適當稀釋(六次方個每毫升)。 b 染色:去九滴細胞懸液移至小試管內,加一滴0.4%胎盼藍溶液,混勻。 c 計數:在3分鐘內,用血球計數板分別計數活細胞和死細胞。
結果觀察:鏡下觀察,死細胞被染成淺藍色,而活細胞拒染。
細胞活力計算:(活細胞數/細胞總數)X100%
注意事項:用胎盼藍染色時,時間不宜過長,否則部分活細胞也會著色,從而干擾計數。

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