基本介紹
- 中文名：肉與肉製品聚磷酸鹽的測定
- 外文名：Meat and meat products—Determintation of plyphosphates
原理,試劑,儀器與設備,分析步驟,試樣準備,薄層板的製備,提取液的製備,磷酸鹽的檢驗,結果,
原理
用三氯乙酸提取肉和肉製品中的聚磷酸鹽，提取液經乙醇、乙醚處理後，在微晶纖維素薄層層析板上分離，通過噴霧顯色，檢驗聚磷酸鹽。
試劑
如無特別說明，所有試劑均為分析純，試驗用水應符合GB/T 6682的要求。
（1）異丙醇。
（2）硝酸。
（3）四水合鉬酸銨溶液（75g/L）：稱取75g四水合鉬酸銨，用水溶解並定容至1000mL。
（4）氫氧化氨。
（5）酒石酸。
（6）焦亞硫酸鈉（150g/L）：稱取150g焦亞硫酸鈉，用水溶解並定容至1000mL。
（7）亞硫酸鈉（200g/L）：稱取200g亞硫酸鈉，用水溶解並定容至1000mL。
（8）1-氨基-2-奈酚-2-磺酸。
（9）乙酸鈉。
（10）三氯乙酸溶液（135g/L）：稱取135g三氯乙酸，用水溶解並定容至1000mL。
（11）乙醚。
（12）乙醇（95%）。
（13）可溶性澱粉。
（14）微晶纖維素。
（15）標準參比混合液
在100mL水中溶解下列物質：
磷酸二氫鈉：200mg；
焦磷酸四鈉：300mg；
三磷酸五鈉：200mg；
六偏磷酸鈉：200mg。
標準參比混合液在4℃條件下可穩定至少四周。
（16）展開劑：
將140mL異丙醇、40mL三氯乙酸溶液和0.6mL氫氧化銨混合均勻，保存於密封瓶中。
（17）顯色劑I：
量取50mL硝酸、50mL四水合鉬酸銨溶液，混合均勻，在上述溶液中溶解10g酒石酸（現用現配）。
（18）顯色劑II
將195mL焦亞硫酸鈉溶液和5mL亞硫酸鈉溶液混勻，然後稱取0.5g 1-氨基-2-奈酚-2-磺酸溶於上述溶液中，在稱取40g乙酸鈉溶於與此溶液中，該溶液貯存於密閉的棕色瓶中，可在4℃條件下保存一周。
儀器與設備
實驗室常規儀器及下列儀器。
（1）機械設備：用於試樣的均質。包括：絞肉機、斬拌機等肉類組織粉碎機。
（2）均漿器。
（3）塗布器（塗布厚度0.25mm）。
（4）玻璃板（10×20cm、5×20cm）。
（5）層析缸。
（6）微量注射器。
（7）吹風機（有冷、熱風擋）。
（8）噴霧器。
（9）乾燥箱
（10）乾燥器。
分析步驟
試樣準備
按GB∕T 9695.19取樣。，取有代表性的樣品不少於200 g。使用適當的機械設備將試樣均質。
均質後的試樣應儘快分析，若不立即分析，應密封冷藏貯存，防止變質和成分發生變化。存儲的試樣在啟用適應重新混勻。
薄層板的製備
將可溶性澱粉0.3g溶於90mL沸水中，冷卻後加入15g微晶纖維素粉，用均漿器勻漿1min。用塗布器把漿液塗在玻璃板上，鋪成0.25mm的漿層，在室溫下自然乾燥1h，然後在100℃烘箱中加熱10min，取出立即放入乾燥器中。也可用商品微晶纖維素板。
提取液的製備
將50mL 50℃溫水倒入裝有50g試樣的燒杯中，立即充分攪拌，加入10g三氯乙酸，徹底攪拌均勻。放入冰櫃冷卻1h後用扇形濾紙過濾。
若濾液渾濁，加入同體積的乙醚並搖勻，用吸管吸去乙醚，再加入同體積的乙醇，振搖1min，靜置數分鐘後在用扇形濾紙過濾。
薄層層析分離
將適量的展開劑倒入層析缸中，使深度為5-10mm，蓋上蓋，避光靜置30min。
用微量注射器吸取提取液3uL，若經過澄清處理的提取液取6uL，在距薄層板板底約兩厘米處點樣，每次點樣1uL，使點的直徑儘量小，邊點邊用吹風機冷風檔吹乾。
註：避免使用熱風吹乾，以防止磷酸鹽水解。
用同樣的方法，將標準參比液3uL點在同一塊板上，距樣品點1-2.5cm，距板底距離與樣品點一致。
打開層析缸，迅速而小心地把點好樣的薄層板放入缸中，蓋上蓋，在室溫下避光展開。
展開到溶劑前沿上升約10cm處，取出薄層板，放入60℃乾燥箱中乾燥10min，或在室溫下乾燥30min，或用吹風機冷風檔吹乾。
磷酸鹽的檢驗
將展開過的薄層板垂直立在通風櫥中，用噴霧器把顯色劑I均勻地噴在薄板上，使之顯現出黃斑。
用吹風機吹乾薄層板後，放入100℃乾燥箱中至少乾燥1h，把硝酸全部去除，將薄層板從乾燥箱中取出，證實是否有刺鼻的硝酸味道。
薄層板冷卻至室溫後，放入通風櫥中，噴顯色劑II，使之呈現出明顯的藍班。
結果
將試樣斑點與聚磷酸鹽標準混合液斑點的比移值相比較，計算其Rf。
正磷酸鹽的斑點經常可見.如果樣品中含有高濃度的磷酸鹽,也可以看見二磷酸鹽或聚合磷酸鹽的斑點。
參比混合液磷酸鹽的Rf值如下：
正磷酸鹽：0.70-0.80
焦磷酸鹽：0.35-0.50
三磷酸鹽：0.20-0.30
六偏磷酸鹽：0
