考馬斯亮藍

考馬斯亮藍（coomassie brilliant blue）一定範圍內與蛋白質濃度成正比，因此可用於蛋白質的定量測定。

基本介紹

• 中文名：考馬斯亮藍
• 外文名：coomassie brilliant blue
• 用於：蛋白質的定量測定
• 分類：G-250和R-250

化學性質

分子結構如右圖。

Coomassie brilliant blue G-250

考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。

考馬斯亮藍G-250在游離狀態下呈紅色，最大光吸收在465nm；當它與蛋白質結合後變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比。

染色

蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立，試劑配製簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度範圍為0～1 000μg/mL，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。

考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。其中考馬斯亮藍G-250由於與蛋白質的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R-250與蛋白質反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

測定含量

簡介

該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用於細胞骨架的檢驗。

濃染液

將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50mL 95%乙醇，加入100mL 85%的磷酸，然後，用蒸餾水補充至1000mL，此染液放4℃至少6個月保持穩定。

樣本準備

儘量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪製標準曲線。

溶解

將待測樣本溶於100~1緩衝溶液中，該緩衝溶液應與製作標準曲線的緩衝溶液相同(最好用PBS)。

稀釋

按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉澱，過濾除去。

作用

每個樣本加5mL

稀釋的染料結合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質結合後，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．

計算

根據標準曲線計算待測樣本的濃度。

沾到皮膚後的處理方法

考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合，反應快速，並且穩定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙。