基本介紹
- 中文名：牛血清清蛋白
- 外文名：Bovine serum albumin
- 含義：通過改變離子強度
- 目的：研究了泡沫提取ADR的條件
- 意義：更好的利用
參數,方法,
參數
通過改變離子強度、阿黴素（ADR）的濃度和酸度，用牛血清白蛋白（BSA）研究了泡沫提取ADR的條件。採用螢光法測定ADR，考察了操作液成分和pH值對測定的影響。實驗結果表明：BSA濃度200mg/L，ADR濃度2．0u/mL，pH2．40，NaCl濃度0．5mol/L，氣體流速15mL/min，進料體積8．0mL時，阿黴素的二次提取率可達70．3%。並且對其作用機理進行了討論，ADR實現泡沫提取的主要動力是ADR的疏水部分與BSA分子間發生的疏水作用力。
方法
利用CTAB/正辛醇：三氯甲烷(4：1V/V)反膠團體系對牛血清白蛋白(BSA)進行相轉移中，通過對萃取體系水相的pH值、離子強度、兩液相的體積比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性劑(直鏈醇分子)等因素的改變，探討了BSA在陽離子表面活性劑體系的萃取機理；研究結果表明選擇合適的條件提取BSA時，萃取率可達到97%，反萃率達到了85%；找到實現牛血清白蛋白分離提純的有效方法。
1、標準曲線測定法
分別取六隻試管，其中一隻加入1.0ml蒸餾水做空白，5隻分別加入不同體積的濃度為100ug/ml牛血清清蛋白標準液，補充水到1.0ml。然後每隻試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。以A595吸光值為縱坐標，牛血清清蛋白的ug數量為橫坐標繪製標準曲線。具體操作見下表。
蛋白質標準曲線測定加樣
試劑空白12345
100ug/ml牛血清清蛋白/ml1.00.10.20.40.60.8
牛血清清蛋白/ug01020406080
去離子水/ml00.90.80.60.40.2
考馬斯亮藍G-250試劑/ml5.05.05.05.05.05.0
吸光值A595
2、蛋白樣品
配製濃度約100ug/ml的待測蛋白質溶液。取一隻試管加入1.0ml蒸餾水做空白，一支加入0.5ml待測蛋白質溶液，補充水到1.0ml。然後每支試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min後，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。用測得的吸光值從標準曲線上查得相當於牛血清清蛋白的ug數量，計算出待測蛋白質的含量。
在標準蛋白質和蛋白質樣品的測定時，為了減小誤差，每一個濃度的蛋白質做3支平行管。
3、試劑配置
牛血清清蛋白標準液結晶牛血清清蛋白或酪蛋白，預先經微量凱氏定氮法標定該蛋白質的百分含量或者根據牛血清清蛋白的消光係數是6.6來計算其百分含量。然後根據該蛋白的純度配置成濃度為100ug/ml的蛋白溶液。
分別取六隻試管，其中一隻加入1.0ml蒸餾水做空白，5隻分別加入不同體積的濃度為100ug/ml牛血清清蛋白標準液，補充水到1.0ml。然後每隻試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。以A595吸光值為縱坐標，牛血清清蛋白的ug數量為橫坐標繪製標準曲線。具體操作見下表。
蛋白質標準曲線測定加樣
試劑空白12345
100ug/ml牛血清清蛋白/ml1.00.10.20.40.60.8
牛血清清蛋白/ug01020406080
去離子水/ml00.90.80.60.40.2
考馬斯亮藍G-250試劑/ml5.05.05.05.05.05.0
吸光值A595
2、蛋白樣品
配製濃度約100ug/ml的待測蛋白質溶液。取一隻試管加入1.0ml蒸餾水做空白，一支加入0.5ml待測蛋白質溶液，補充水到1.0ml。然後每支試管加入5.0ml考馬斯亮藍G-250試劑，搖勻放置5min後，在紫外-可見分光光度計595nm處測定吸光值。用測得的吸光值從標準曲線上查得相當於牛血清清蛋白的ug數量，計算出待測蛋白質的含量。
在標準蛋白質和蛋白質樣品的測定時，為了減小誤差，每一個濃度的蛋白質做3支平行管。
3、試劑配置
牛血清清蛋白標準液結晶牛血清清蛋白或酪蛋白，預先經微量凱氏定氮法標定該蛋白質的百分含量或者根據牛血清清蛋白的消光係數是6.6來計算其百分含量。然後根據該蛋白的純度配置成濃度為100ug/ml的蛋白溶液。
