置換合成法

該方法利用第一鏈在反轉錄酶作用下產生的cDNA:mRNA雜交鏈不用鹼變性,而是在dNTP存在下,利用RNA酶H在雜交鏈的mRNA鏈上造成切口和缺口。從而產生一系列RNA引物,使之成為合成第二鏈的引物,在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的作用下合成第二鏈。