細胞生物技術實驗指南

《細胞生物技術實驗指南》是2009年化學工業出版社出版的圖書。

基本介紹

• 書名：細胞生物技術實驗指南
• ISBN：9787122034762
• 出版社：化學工業出版社
• 出版時間：2009年1月1日 
• 裝幀：平裝
• 開本：16開

基本相信

作　者：刁勇，許瑞安編

版　次：1

頁　數：416

裝　幀：平裝

開　本：16開

所屬分類：圖書 > 科學與自然 > 生物科學

內容簡介

《細胞生物技術實驗指南》本書著重精選細胞工程和生物技術領域常用的技術方法和實驗方案，不僅介紹常規細胞培葬技術和問題解決指南，同時提供特殊細胞（如幹細胞和神經細胞等）的分離、純化和培養手段。

有目的地引入基用和蛋白晶片檢測、RNA十擾、基因治療病毒載體、細胞核移植、十細胞及體細胞重新編程等前沿技術。每一種主要的技術方法均從基本原理人手，以主要儀器設備和試劑、操作方法與結果分析、實驗技巧及注意事項等為重點逐一闡述，以期為從事細胞T程、生物技術、醫藥衛生、農業、食品等生命科學等領域的研究人員、技術操作人員以及大巾專高校師生·提供一本前瞻性高、重複性好、町操作性兼備的實驗技術指南。

作者簡介

需瑞安，博士。原籍福建晉江，教育部分子藥物工程研究中心主任，教授、博士生導師，華僑大學分子藥物研究所所長、國際癌細胞與基因療法學會常務理事，紐西蘭食品研究院專業委員、國家863“十五”、“十一五”肺癌臨床前基因療法課題組副組長，北京協和醫院榮譽教授、中國海洋大學海洋藥物客座教授、山東大學教授。《中國臨床藥理學與治療學》編委、顧問。從事分子藥物學，分子藥理學、分子醫學、生物技術和細胞工程研究。為口服基因療法主要奠基人之一。1 983年錄取教育部公派出國留學。1989年獲得Otago大學博士。先後在紐西蘭、加拿大、美國、中國香港著名高校及科研機構從事科研與教學。其部分研究工作發表於Nature medicine．Cancer ResearchScience， Molecular Therapy， Hepatology，PNAS等國際學術刊物。2007年入選美國Marquis科學與工程版Whos Who。

目錄

第一章細胞與生物技術基礎1

第一節細胞生物學1

一、細胞生物學研究內容與現狀1

二、細胞生物學發展史3

三、細胞生物學技術4

第二節細胞分子生物學6

一、細胞分子生物學的發展6

二、細胞分子生物學技術6

第三節細胞工程7

一、基本概念7

二、細胞工程的發展進程7

三、細胞工程技術7

四、展望9第二章細胞顯微觀測技術10

第一節細胞顯微技術10

一、光學顯微鏡10

二、電子顯微鏡23

三、掃描探針顯微鏡32

第二節細胞超微標記示蹤技術38

一、電鏡細胞化學39

二、免疫電鏡技術51

三、電鏡原位雜交技術64第三章細胞檢測技術69

第一節流式細胞儀檢測技術69

一、流式細胞儀的工作原理和基本操作69

二、流式細胞術樣品製備技術71

三、細胞免疫螢光染色技術74

四、細胞分選技術77

第二節細胞化學和免疫細胞化學79

一、細胞化學79

二、免疫細胞化學85

第三節細胞增殖與凋亡100

一、細胞增殖100

二、細胞凋亡106第四章細胞的培養與分離技術121

第一節細胞培養基本方法和技術121

一、細胞的原代培養121

二、細胞的傳代培養124

三、細胞的凍存與復甦125

四、細胞計數與成活率檢測126

五、培養物污染的判斷及防止127

第二節幾種特殊細胞的培養與分離130

一、神經元細胞的培養與分離130

二、肝細胞的培養與分離131

三、星狀細胞的培養與分離133

四、上皮細胞的培養與分離135

五、內皮細胞的培養與分離137

六、腫瘤細胞的培養與分離138第五章細胞器的分離與製備技術140

第一節細胞膜140

一、從懸浮細胞中製備細胞膜140

二、從組織培養皿中的匯合或部分匯合細胞中分離頂層膜、基底膜或中間膜142

三、從生長於微載體上的細胞中分離細胞膜143

第二節橋粒144

一、從牛舌或牛口鼻部分離橋粒144

二、分級分離橋粒145

第三節細胞質145

一、網織紅細胞和紅細胞胞質液的製備145

二、用培養細胞製備胞質液146

第四節線粒體146

一、從肝臟中分離線粒體147

二、從組織培養細胞中分離線粒體147

第五節高爾基體148

一、從大鼠肝臟中分離高爾基複合體148

二、從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體149

第六節粗微體150

一、從狗的胰臟中製備粗微體150

二、從組織培養細胞中製備粗微體152

第七節核糖體154

第八節細胞核155

一、從肝臟組織中製備細胞核155

二、用滲透溶脹法從HeLa細胞懸浮培養物中製備細胞核156

三、活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中製備細胞核157

第九節細胞核基質158

一、從培養細胞中製備細胞核基質158

二、從組織中分離製備細胞核基質159

第十節核仁160

一、從大鼠肝臟中分離核仁160

二、從HeLa細胞中分離核仁161

第十一節微管162

一、通過組裝/解聚從缺少組裝驅動成分的緩衝液中分離微管163

二、在紫杉醇存在時通過組裝的方法分離微管164

第十二節中間絲164

一、從培養的細胞中分離Ⅰ～Ⅲ型中間絲165

二、從組織中分離中間絲（從牛舌上皮分離角蛋白中間絲）166

第六章細胞的誘導分化技術167

第一節正常細胞的誘導分化167

一、小鼠氣管上皮細胞的誘導分化167

二、視神經節細胞的誘導分化169

第二節腫瘤細胞的誘導分化171

一、環腺苷酸對腦膠質瘤細胞的誘導分化173

二、紅景天苷對人肝癌細胞的誘導分化作用174

三、5氮雜脫氧胞苷增強苯丁酸鈉對急性髓系白血病細胞的誘導分化176

第三節幹細胞的誘導分化177

一、胚胎幹細胞的誘導分化178

二、神經幹細胞的誘導分化179

三、髓造血幹細胞的誘導分化181

四、間充質幹細胞的誘導分化183

五、視網膜幹細胞的誘導分化184

六、表皮幹細胞的誘導分化186

七、肝臟幹細胞的誘導分化188

八、胰腺幹細胞的誘導分化189

九、肌肉干細胞的誘導分化192

十、小腸黏膜幹細胞的誘導分化194

十一、腫瘤幹細胞的誘導分化196第七章幹細胞分離與培養技術198

第一節胚胎幹細胞198

一、小鼠胚胎幹細胞的分離培養198

二、人胚胎幹細胞的分離培養199

三、飼養層細胞的分離201

四、胚胎幹細胞的傳代202

第二節成體幹細胞204

一、人體MSC（hMSC）的培養204

二、採用hMSC製作人工心臟瓣膜205

三、採用hMSC製作人工骨206第八章細胞內基因的導入208

第一節物理方法209

一、電穿孔轉染法209

二、細胞顯微注射技術210

三、基因槍轉染法213

第二節化學方法214

一、磷酸鈣沉澱法214

二、脂質體介導DNA轉染法215

三、DEAE葡聚糖轉染法216

四、陽離子聚合物轉染法216

第三節生物方法217

一、逆轉錄病毒載體轉染法217

二、腺病毒載體轉染法218

三、腺相關病毒載體轉染法219第九章哺乳動物細胞RNAi技術221

第一節siRNA的設計221

第二節siRNA的製備228

一、化學合成方法229

二、T7RNA聚合酶體外轉錄合成dsRNA和siRNA230

三、用RNaseⅢ消化長片段雙鏈RNA製備siRNA234

四、siRNA表達質粒載體和病毒載體240

五、siRNA表達框246

第三節siRNA導入哺乳動物細胞247

一、脂質體248

二、多肽MPG轉染251

三、磁介導轉染技術253

第四節siRNA文庫255

一、隨機siRNA文庫255

二、已知基因RNAi文庫258第十章細胞內基因的檢測262

第一節外源基因表達的轉錄水平檢測262

一、Northern印跡技術262

二、RTPCR技術265

三、實時定量PCR技術267

第二節外源基因表達的翻譯水平檢測268

一、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳法269

二、雙向聚丙烯醯胺凝膠電泳272

三、蛋白質印跡275

四、Eastern印跡276

五、酶聯免疫分析技術277

六、免疫沉澱技術279

七、蛋白質晶片技術281

八、蛋白質生物功能測定法282

第十一章染色體檢測技術284

第一節染色體標本的製備284

一、染色體標本的常規製片方法284

二、空氣乾燥法284

第二節細胞染色體顯帶技術286

一、染色體C帶分帶技術286

二、染色體G帶分帶技術287

三、染色體Q帶分帶技術288

四、染色體R帶分帶技術288

五、姐妹染色單體分化染色技術289

六、染色體銀染方法290

七、高分辨G帶技術291

第三節細胞染色體的原位雜交292

一、標本的製備技術293

二、原位雜交技術294

三、與染色體分帶技術的結合295第十二章細胞信號通路的檢測方法296

第一節體內信號轉導通路的檢測——順式報告系統296

第二節體內信號轉導通道的檢測——反式報告系統299

第三節化學免疫檢測方法302

第四節磷酸化蛋白激酶免疫沉澱檢測303第十三章細胞與重組病毒載體的生產306

第一節腺病毒的製備方法306

一、腺病毒製備系統的概述306

二、細胞內同源重組法製備腺病毒載體306

三、細胞外同源重組法製備腺病毒載體308

四、腺病毒載體的大規模擴增310

五、重組腺病毒的鑑定311

第二節腺相關病毒的製備方法313

一、293細胞/三質粒生產系統314

二、AAV包裝細胞系的建立和AAV的生產316

三、AAV生產細胞系系統318

四、rHSV輔助質粒生產系統321

第三節單純皰疹病毒載體的製備323

一、輔助病毒依賴性HSV擴增子載體生產工藝323

二、以黏粒為基礎生產重組單純皰疹病毒324

三、CreloxP重組系統生產HSV1擴增子載體327

四、利用微載體生產重組單純皰疹病毒載體330

五、利用生物反應器規模化生產重組HSV載體332

第四節逆轉錄病毒載體製備方法334

一、依賴於包裝細胞系的穩定生產方法334

二、多質粒共轉染的瞬時生產方法337第十四章細胞融合與單克隆抗體338

第一節細胞融合338

一、細胞融合技術338

二、雜交細胞的篩選341

第二節單克隆抗體的生產技術345

一、動物的選擇以及免疫345

二、雜交瘤細胞的融合與篩選347

三、單克隆抗體的篩選檢測350

四、雜交瘤細胞的克隆化培養355

五、雜交瘤細胞鑑定、凍存與復甦357

六、單克隆抗體的大量製備359

七、單克隆抗體的純化360

八、單克隆抗體的鑑定361

九、單克隆抗體的標記364第十五章治療性克隆技術369

第一節細胞核移植技術370

一、羅斯林技術370

二、檀香山技術372

第二節體細胞重編程技術373

一、體細胞與多能幹細胞融合技術373

二、體細胞與多能幹細胞的提取物共孵育技術373

三、特定基因的表達誘導技術375第十六章細胞生物技術的套用379

第一節醫療檢測379

一、分子生物學檢測技術379

二、免疫學檢測技術386

第二節細胞大規模高效培養技術的工業套用388

一、疫苗的生產388

二、基因重組蛋白藥物的生產390

第三節幹細胞移植在疾病治療中的套用392

一、BDNF（腦源性神經營養因子）基因修飾的人骨髓間充質幹細胞移植治療

帕金森病392

二、hIGF1基因修飾骨髓間充質幹細胞移植修復兔關節軟骨缺損400

三、骨髓間充質幹細胞移植治療心肌梗死406

四、人胰腺幹細胞在糖尿病治療中的套用411

參考文獻416

前言

伴隨符細胞生物學、分子生物學、免疫學、遺傳學等學科的迅猛發展，以及計算機、網路信息等島新技術的普遍套用，生命科學研究的進展突飛猛進。作為生命科學主要分支的細胞工程及生物技術·將為解決人類面臨的重大問題，如糧食、健康、環境、能源等方而存的問題，提供一個瀅有力的工具，因而具有廣闊的發展前景，被認為是21世紀科學T程技術重要的核心之一。目前，細胞工程及生物技術最活躍的套用領域是生物醫藥行業，世界各國均把生物醫藥行業視為最具潛力的戰略產業，紛紛投入巨額資金，進行相戈產船與技術的開發，井匕逐步形成一個巨大的高新技術產業，產生了巨大的社會效益和經濟效益。