碰撞誘導裂解(CID)MS-MS質譜被大量用於對糖基化多肽的定位分析，但在CID裂解過程中，蛋白質肽段裂解之前分子間的振動能量會重新分配，因此，多肽上被修飾部分的最弱的鍵很容易被打斷，導致中性丟失的產生。
基本介紹
- 中文名：碰撞誘導裂解譜
- 作用：糖基化多肽的定位分析
- 領域：生物、化學
- 套用：生產、加工
- 優點：定位精確
- 缺點：中性丟失
簡介,總結,
簡介
蛋白質的糖基化修飾是美拉德反應的初級階段，即Amadori產物，基於美拉德反應的糖基化修飾是食品蛋白質改性的常用技術，因此其在食品加工過程中起著重要作用，並且糖基化修飾情況也與糖尿病、腎病及視網膜疾病有直接關係。對糖基化蛋白質的修飾位點的精確定位是在精確分子水平上理解蛋白質功能性質變化機制的基礎。採用LC-MS技術可以很好的對蛋白質糖基化修飾進行定位分析，就葡萄糖的修飾而言，其糖基化初級產物的質譜峰會發生質荷比162的偏移，通過觀察質譜峰的偏移量是否為162的倍數就可以對糖基化組裝蛋白進行確認。但一級質譜只能確定多肽是否被糖基化修飾，採用MS-MS質譜可以對糖基化肽進行序列上糖基化位點的精確定位。
碰撞誘導裂解(CID)MS-MS質譜被大量用於對糖基化多肽的定位分析，但在CID裂解過程中，蛋白質肽段裂解之前分子間的振動能量會重新分配，因此，多肽上被修飾部分的最弱的鍵很容易被打斷，導致中性丟失的產生。但是特定的中性丟失如3H2O+HCHO的形成可以為糖基化肽段中位點的確定提供幫助，就是採用糖基化肽段的中性丟失觸發三級質譜，並通過中性丟失後結構進行糖基化位點的定位分析。蛋白質糖基上發生的多項中性丟失(如H2O、2H2O、3H2O、4H2O、3H2O+HCHO和C6H10O5)峰為MS-MS圖譜中的主要質譜峰，因此肽段裂解片段非常有限甚至很弱。
最近，電子轉移解離(ETD)技術被套用於改進的線性離子阱捕捉質譜中，ETD和ECD比較相似，是依賴於一個電子獲得陰離子的，在進行糖基化或磷酸化肽的MS-MS分析時，主要得到大量的c和z族離子，從而根據ETD碎片圖譜分析得出多肽的序列。研究表明，ETDMS-MS可以生成大量的甚至完全的c和z族離子，相對於CID MS-MS而言，其是研究糖基化肽的序列及糖基化組裝位點定位的非常有用的質譜分析技術。但這種技術也有一定的局限性，如對於雙離子或者m/z大於850的離子效果不是很好，因此其在商業質譜套用中仍然存在一定的局限性，需要將ETD MS-MS、CID NL MS3等方法進行結合套用於研究蛋白質的糖基化或磷酸化組裝修飾。
通過對蛋白質進行酶解後的多肽進行LC MS-MS掃描可以實現對糖基化位點的定位和半定量分析。雖然糖基化修飾蛋白質的特殊位點可以識別的，但是大部分情況下，糖基化位點的識別是建立在單糖修飾導致的質譜峰的增加，很難對蛋白質組學中的更加複雜的分析進行研究。
總結
LTQ MS的一級質譜可以對糖基化多肽進行初步識別和鑑定。
對糖基化修飾多肽而言，ETD比較適合於胺基酸序列長度為中等，帶2個電荷的糖基化修飾肽段的裂解，對於較大分子質量的糖基化修飾肽的ETD裂解片段較少，判定方面存在一定的困難。
糖基化肽的CID裂解碎片中主要為離子峰，由於在裂解過程中極易發生中性丟失，因此其有效裂解碎片的峰值一般較小，且整個質譜圖雜峰較多，有用峰值較少，對糖基化的定位分析存在一定難度。
