瞬時表達

瞬時表達,即瞬時轉染後的初期,質粒或DNA片段是游離在細胞中的,能夠進行表達,稱為瞬時轉染表達。隨後,游離在細胞中的質粒或DNA片段有兩種歸化,一種是被降解,還有一種是插入染色體中而能夠持續地穩定地表達。
在載體選用方面,瞬時表達可以不需要篩選標籤,如常用的NEO抗G418等,但使用穩定表達的載體亦可以用來進行瞬時表達。
植物瞬時表達系統
當外源基因導入植物細胞中以後,其表達方式有瞬時表達(transient expression)和穩定表達(stable expression)兩種。在瞬時表達狀態的基因轉移中,引入細胞的外源DNA和宿主細胞染色體DNA並不發生整合。這些DNA一般隨載體進入細胞後12小時內就可以表達,並持續約80小時左右。在穩定表達狀態的基因轉移中,導入宿主細胞的DNA整合到細胞染色體DNA上,以永久形式存在,並可傳給後代,形成穩定的轉化細胞。基因的導入方法可分為間接轉基因方法和直接轉基因方法。
植物瞬時表達系統在啟動子分析、基因功能分析和生產重組蛋白方面用途廣泛。並且具有如下優點:①簡單快速。轉化基因可在轉化的一周內進行分析,避免了組織培養等繁雜過程;②表達水平高。當單鏈的T-DNA進入植物細胞後,許多未整合到植物基因組中的游離外源基因同樣可以表達。③安全有效。不受植物生長發育過程的影響,不產生可遺傳的後代,結果可靠直觀,不存在基因漂移的風險。常用基因槍轉化和農桿菌真空滲透法

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