基本介紹
- 中文名：濁點萃取法
- 外文名：cloud point extraction
- 簡稱：CPE
- 類型：液—液萃取技術
概念,套用,
概念
CPE 法除了利用增溶作用外，還利用了表面活性劑另一個重要性質——濁點現象。溶液靜置一段時間(或離心)後會形成兩個透明的液相：一為表面活性劑相(約占總體積的5%)；另一為水相(膠束濃度等於CMC)。外界條件(如溫度)向相反方向變化，兩相便消失，再次成為均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物質如膜蛋白，與表面活性劑的疏水基團結合，被萃取進表面活性劑相，親水性物質留在水相，這種利用濁點現象使樣品中疏水性物質與親水性物質分離的萃取方法就是濁點萃取。圖1顯示了由溫度變化引發的這種相分離現象。溫度的改變，引起水化層的破壞，增強了表面活性劑的疏水性。
套用
分離純化中的套用
CPE 法可用於分離膜蛋白、酶、動物、植物和細菌的受體，還可以替代一些分離方法如硫酸銨分級法作為純化蛋白的第一步，與色譜方法聯用。另外，CPE 法分離純化蛋白質已經可以實現大規模操作。Minuth等人成功地進行了膽固醇氧化酶濁點萃取的中試研究。雖然使用離心分離器可以使CPE大規模連續進行，但商品離心分離器用於CPE 的效率和容量仍需進一步研究。而且，他們發現相分離操作受細胞培養時產生的表面活性物質影響較大，體系兩相間密度差較小，表面張力較小，含產物的表面活性劑相的流變學行為較複雜，操作較難。表1列出了CPE法近幾年來在蛋白質分離純化中的套用。
(1) CPE法用於分離純化膜蛋白
膜蛋白(內嵌膜蛋白、外圍膜蛋白)疏水性強、難溶於水，抽提內嵌膜蛋白時，既要削弱它與膜脂的疏水性結合，又耍使它保持疏水基在外的天然狀態，較難分離純化。由於表面活性刑具有兩親性，它一直作為腹蛋白理想的增溶劑。增溶時，膜蛋白琉水部分嵌入膠束的硫水核中而與膜脫離，又保持了膜蛋白表面的廢水結構。相分離後，膜蛋白與表面活性劑共同析出，與親水性蛋白質分離。所以，CPE 法在分離純化膜蛋白方面極有優勢。
(2) 與其它分析技術的聯用
CPE 可以作為高效液相色譜(HPLC)、流動注射分析(FIA)、毛細管電泳(CE)等儀器分析的樣品前處理方法，提高檢出靈敏度。表面活性別可以防止樣品吸附在玻璃容器上，易於與FIA中的載液及HPLC中的有機流動相或膠束流動相混合，可以直接進樣。但是在很多套用中需要除去表面活性劑後再與儀器聯用。將萃取物與表面活性劑分離的方法很多。對於CMC>1mM 的表面活性劑如兩性離子表面活性劑可用透析法，但操作時間較長(24h左右)。對於CMC 較小的表面活性劑可通過色譜柱分離除去，如凝膠柱、毛紉管柱等，分離出的表面活性劑可以再利用，也可以作焚燒處理。但CPE作為HPLC 的樣品前處理方法有兩個缺點：第一，常用的表面活性劑在UV區域有很強的背景吸收。第二，操作時間較長，從色譜柱上需用幾個小時洗脫表面活性劑。表面活性劑的洗脫可能會干擾分析物的測定。
