用放射性同位素或螢光物質標記的特異DNA或RNA分子，通過分子雜交移術檢測與之互補的核苷酸順序的技術。
核酸分子探針的製備方法有以下幾種：
缺口移位標記
DNA水解酶能夠使雙鏈DNA分子產生缺口。DNA聚合酶能將缺口從5'-3'方向擴大，同時將5'端的核苷酸切除，此酶還同時具有5'-3'聚合功能，在有4種單核苷酸(dNTP)的反應系統中將切去的核苷酸補上。
基本介紹
- 中文名：核酸分子探針
- 外文名：Nucleic acid molecular probe
- 技術：分子雜交移術檢測與之互補
- 方法1：缺口移位標記
- 方法2：末端標記
- 方法3：化學標記
簡介,製備方法,缺口移位標記,末端標記,化學標記,生物素標記,優點,
簡介
用放射性同位素或螢光物質標記的特異DNA或RNA分子，通過分子雜交移術檢測與之互補的核苷酸順序的技術。
製備方法
核酸分子探針的製備方法有以下幾種：
缺口移位標記
DNA水解酶能夠使雙鏈DNA分子產生缺口。DNA聚合酶能將缺口從5'-3'方向擴大，同時將5'端的核苷酸切除，此酶還同時具有5'-3'聚合功能，在有4種單核苷酸(dNTP)的反應系統中將切去的核苷酸補上。缺口沿著DNA的另一條鏈位移，同時有放射性的核苷酸就會摻入DNA分子中，成為有高比放性的DNA探針。一般單核苷酸標記的摻入量30%，比放性可達108 cpm/μg DNA。
末端標記
T4多聚核苷酸激酶能催化γ一dNTP的γ磷轉移至DNA或RNA5'-OH末端的反應。因此常用γ-32P-dNTP標記DNA或RNA。為了增高比放性，可將DNA或RNA大分子水解成適當長度的片段，以便有較多的末端被標記。
化學標記
DNA在pH5的含放射性碘(125I)
的水溶液中加熱或在三氯化鉈、催化可被碘化。碘原子通過形成5-碘胞嘧啶，以穩定的共價鍵摻入DNA分子中。碘與胸腺嘧啶和腺嘌呤不反底與鳥嘌呤有微弱的反應。碘化後的DNA分子性質(如轉化、復性等)不改變。DNA單鏈的95%以上的胞嘧啶可被碘化。此法也可用於標記RNA,只不過有少量的5-碘尿嘧啶和大量的尿嘧啶水化物形成。反應條件與單鏈DNA相似，只是pH在中性為宜，以避免腺嘌呤和RNA鏈的斷裂。
生物素標記
核酸探針除可用同位素標記外，還可用生物素標記。帶有生物素的尿嘧啶能摻入到核酸分子中。探針雜交後形成的雜種分子與鏈抗生素蛋白-生物素-辣根過氧化物酶複合物作用產生綠色螢光，很易檢測。
優點
核酸分子探針廣泛用於分子遺傳學研究。如索森和諾森雜交技術是篩選和分離基因的重要方法(見核酸分子雜交)。上述方法中以缺口移位標記法最為常用。末端標記法和化學標記法更適用於RNA，由於生物素標記無放射性污染，又無半衰期限制，操作簡便、價格便宜，所以套用廣泛。
