彗星實驗又稱單細胞凝膠電泳實驗，是由Ostling等於1984年首次提出的一種通過檢測DNA鏈損傷來判別遺傳毒性的技術。
基本介紹
- 中文名：彗星實驗
- 外文名：Comet assay
- 又稱：單細胞凝膠電泳實驗
- 提出時間：1984年
- 提出者：Ostling等
它能有效地檢測並定量分析細胞中DNA單，雙鏈缺口損傷的程度。當各種內源性和外源性DNA損傷因子誘發細胞DNA鏈斷裂時，其超螺旋結構受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結構受到破壞，細胞內的蛋白質、RNA以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由於分子量太大不能進入凝膠而留在原位。在中性條件下，DNA片段可進入凝膠發生遷移，而在鹼性電解質的作用下，DNA發生解螺旋，損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。由於這些DNA的分子量小且鹼變性為單鏈，所以在電泳過程中帶負電荷的DNA會離開核DNA 向正極遷移形成“彗星”狀圖像，而未受損傷的DNA部分保持球形。DNA受損越嚴重，產生的斷鏈和斷片越多，長度也越大，在相同的電泳條件下遷移的DNA量就愈多，遷移的距離就愈長。通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可以測定單個細胞DNA損傷程度，從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應的關係。該法檢測低濃度遺傳毒物具有高靈敏性，研究的細胞不需處於有絲分裂期。同時，這種技術只需要少量細胞。
彗星實驗專用載玻片
彗星實驗專用載玻片