基因外區

狂犬病是由狂犬病病毒(rabiesvirus,RV)引起的迄今為止人類病死率最高的急性傳染病,一旦發病,病死率高達100%。狂犬病宿主範圍廣,幾乎所有的溫血動物都對RV易感,狂犬病在世界範圍內廣泛分布,呈地方性流行,目前尚未得到完全控制,全世界每年約有3.5萬~5萬人死於狂犬病,該病主要分布在亞洲、非洲和拉丁美洲等開發中國家,但在狂犬病已經滅絕的歐美地區又出現了新的變異株「’〕。狂犬病在我國曾一度得到有效控制,但近年來狂犬病疫情回升很快。因此,它仍然是一個重要的公共衛生問題。RV糖蛋白是唯一能刺激機體產生中…

為獲得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,採用RT-PCR方法從狂犬病病毒ERA株中擴增了編碼RV糖蛋白的全長基因,將其克隆於pMD18-T載體,再經PCR擴增出糖蛋白全長基因和膜外區基因,將其分別亞克隆至原核表達載體pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,經PCR和雙酶切鑑定以及序列分析,表明已成功構建了重組質粒。將重組質粒轉化到大腸埃希氏菌BL21(DE3)中進行表達,結果顯示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外區基因表達量最高,目的蛋白表達量占菌體總蛋白的45.4%。經Western-blotting檢測,不同載體表達的糖蛋白膜外區產物均可與兔抗RV多抗發生特異性反應,表明,重組蛋白具有良好的反應原性。

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