基本介紹
- 中文名：半強度MS液體培養基
培養技巧,水稻愈傷,
培養技巧
組織培養是否能夠獲得成功，主要取決於對培養基的選擇。不同的培養基具有不同的特點，也就適合於不同的植物種類和接種材料。在開展組織培養項目時，首先要對各種培養基進行了解和分析，以便能從中選擇合適的使用。組培用的培養基一般包括基礎培養基和激素，但是植物激素的種類和數量，隨著不同培養階段和不同材料有變化，因此各培養基配方中均不列入植物激素。常用的基礎培養基有ms培養基，B5培養基，N6培養基。
MS培養基是目前使用最普遍的培養基。其具有較高的無機鹽濃度，能夠保證組織生長所需的礦質營養還能加速愈傷組織的生長。由於配方中的離子濃度高，在配製、貯存和消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不會影響離子間的平衡。MS固體培養基可用於誘導愈傷組織，也可用於胚、莖段、莖尖及花葯的培養，其液體培養基用於細胞懸浮培養時能獲得明顯的成功。MS培養基的無機養分的數量和比例比較合適，足以滿足植物細胞在營養上和生理上的需要。因此，一般情況下，不用再添加胺基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機附加成分。和其它培養基的基本成分相比，MS培養基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的顯著特點。
愈傷組織不能進行光合作用。在植物的組織培養中，從一塊外植體形成典型的愈傷組織，大致要經歷三個時期：啟動期、分裂期和形成期。啟動期指細胞準備進行分裂的時期。外源植物生長激素對誘導細胞開始分裂效果很好。常用的有萘乙酸、吲哚乙酸、細胞分裂素等。通常使用細胞分裂素和生長素比例在1:l來誘導植物材料愈傷組織的形成。分裂期是指外植體細胞經過誘導以後脫分化，不斷分裂、增生子細胞的過程。分裂期愈傷組織的特點是：細胞分裂快，結構疏鬆，顏色淺而透明。分化期是指在分裂的末期，細胞內開始出現一系列形態和生理上的變化，從而使愈傷組織內產生不同形態和功能的細胞。這些細胞類型有薄壁細胞、分生細胞、色素細胞、纖維細胞等等。外植體的細胞經過啟動、分裂和分化等一系列變化，形成了無序結構的愈傷組織。如果在原來的培養基上繼續培養愈傷組織，會由於培養基中營養不足或有毒代謝物的積累，導致愈傷組織停止生長，甚至老化變黑、死亡。如果要讓愈傷組織繼續生長增殖，必須定期地（2～4個星期）將它們分成小塊“接種到新鮮的培養基上，這樣愈傷組織就可以長期保持旺盛的生長。
指培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用於單種微生物培養和鑑定。
愈傷組織細胞在一種包含所有必需物質的培養基中培養了幾個小時，其中一種化合物具有放射性(氚標記)當這些細胞被固定後鏡檢，利用放射自顯影技術發現放射性物質集中於細胞核、線粒體和葉綠體，可以肯定標記的化合物是胸腺嘧啶脫氧核苷酸。
水稻愈傷
在外植體上形成以後，愈傷組織的繼承培養在已充分發育，但沒有出現老化現象之前，應及時從外植體上分離下來，轉入繼代培養基上進行繼代培養。分離是必要的措施，繼代培養時若連同外植體就會影響愈傷組織的產量和質量，可能是由於殘存的外植體在死亡過程中會產生某些有毒物質，愈傷組織會出現老化、粘化及不正常分化等現象。一般情況下，從外植體上分離的愈傷組織須經過4～6周的培養才能得到充分的發育。為了增殖發育良好的愈傷組織，繼代培養是有效的措施。在良好的培養條件下，甘蔗愈傷組織可繼代一年以上而不喪失分化能力。
半強度MS液體培養基影響甘蔗愈傷組織繼代培養的主要因素是激素。為協調繼代培養中既要維持愈傷組織增殖生長良好、又要保持愈傷組織的分化能力的矛盾，就必須篩選最佳的激素濃度。有報導指出，2，4－D（2～3mg/L）對保持愈傷組織不分化是有效的，但隨繼代培養次數的增加，其分化綠苗的能力也隨之下降。
