《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準:出入境口岸霍亂弧菌多重聚合酶鏈 反應操作規程(SN/T 1872-2007)》的附錄A為資料性附錄。本標準由國家認證認可監督管理委員會提出並歸口。本標準起草單位：中華人民共和國珠海出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局、中國CDC傳染病預防控制所、中華人民共和國廣西出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國遼寧出入境檢驗檢疫局。
基本介紹
- 中文名：出入境口岸霍亂弧菌多重聚合酶鏈 反應操作規程
- 書名：出入境口岸霍亂弧菌多重聚合酶鏈 反應操作規程
- 作者：國家質量監督檢驗檢疫總局
- 出版日期：2007
- 出版社：中國標準出版社
- 頁數：6
- 開本：16
內容簡介,文摘,
內容簡介
《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準:出入境口岸霍亂弧菌多重聚合酶鏈 反應操作規程(SN/T 1872-2007)》由中國標準出版社出版。
文摘
著作權頁：
6.2實驗室檢驗
6.2.1 樣品採集、增菌培養和細菌分離鑑定
按照GB 15984和SN/T 1239相關標準進行。
6.2.2 用於細菌DNA提取的樣本的前處理
6.2.2.1 霍亂弧菌菌株的處理
用無菌環從平板上取四分之一個到1個純菌落的菌量，混懸於100 μL的純水中。模板提取見6.2.3。
取純菌的LB或鹼性蛋白腖增菌液1 mL加到1.5 mL離心管中，以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，用1 mL生理鹽水或pH 7.4的PBS洗一遍，8000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清；沉澱物用於模板提取見6.2.3。
6.2.2.2糞便和嘔吐物樣本的直接處理
直接從糞便和嘔吐物樣本中提取模板時，可取水樣糞便或嘔吐物約200 μL或200 mg，用1 mLPBS（pH7.4）懸浮，2000 r/min離心5 min，收集上清液於1.5 mL離心管，10000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。同時，可對上述收集的糞便上清液進行1：10倍的連續稀釋2次，10000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。並將糞便的3種稀釋樣本的DNA模板分別進行PCR檢測。
6.2.2.3水樣直接的處理
將100 mL—500 mL水樣用0.2μm濾膜過濾，取濾膜懸浮於1 mL～5 mL蒸餾水中，振盪混勻。樣本可採用不稀釋、1： 20稀釋和1：100稀釋的方法進行PCR檢測。取l mL樣品以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，沉澱物用於模板提取見6.2.3。
6.2.2.4增菌液的處理
所有樣本均可按照GB 15984和SN/T 1239相關標準方法進行增菌，取增菌液1 mL加到1.5 mL離心管中，以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，用1 mL生理鹽水或pH 7.4的PBS洗一遍，8000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。
進行霍亂弧菌的監測時宜採用增菌法，用增菌液提取擴增模板。
6.2實驗室檢驗
6.2.1 樣品採集、增菌培養和細菌分離鑑定
按照GB 15984和SN/T 1239相關標準進行。
6.2.2 用於細菌DNA提取的樣本的前處理
6.2.2.1 霍亂弧菌菌株的處理
用無菌環從平板上取四分之一個到1個純菌落的菌量，混懸於100 μL的純水中。模板提取見6.2.3。
取純菌的LB或鹼性蛋白腖增菌液1 mL加到1.5 mL離心管中，以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，用1 mL生理鹽水或pH 7.4的PBS洗一遍，8000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清；沉澱物用於模板提取見6.2.3。
6.2.2.2糞便和嘔吐物樣本的直接處理
直接從糞便和嘔吐物樣本中提取模板時，可取水樣糞便或嘔吐物約200 μL或200 mg，用1 mLPBS（pH7.4）懸浮，2000 r/min離心5 min，收集上清液於1.5 mL離心管，10000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。同時，可對上述收集的糞便上清液進行1：10倍的連續稀釋2次，10000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。並將糞便的3種稀釋樣本的DNA模板分別進行PCR檢測。
6.2.2.3水樣直接的處理
將100 mL—500 mL水樣用0.2μm濾膜過濾，取濾膜懸浮於1 mL～5 mL蒸餾水中，振盪混勻。樣本可採用不稀釋、1： 20稀釋和1：100稀釋的方法進行PCR檢測。取l mL樣品以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，沉澱物用於模板提取見6.2.3。
6.2.2.4增菌液的處理
所有樣本均可按照GB 15984和SN/T 1239相關標準方法進行增菌，取增菌液1 mL加到1.5 mL離心管中，以12000 r/min離心2 min集菌，去上清液，用1 mL生理鹽水或pH 7.4的PBS洗一遍，8000 r/min離心5 min，儘量吸乾上清液；沉澱物用於模板提取見6.2.3。
進行霍亂弧菌的監測時宜採用增菌法，用增菌液提取擴增模板。
