凝膠電泳壓印雜交技術

凝膠電泳壓印雜交技術,是Southern 於1975年建立的一種DNA 轉移方法。該法利用硝酸纖維素膜或經特殊處理的濾紙或尼龍膜具有吸附DNA 的功能,先作DNA 片段的凝膠電泳,並將凝膠電泳中的DNA 區帶吸附到膜上,然後直接在膜上進行核素標記核酸探針與被測樣品之間的雜交,再通過放射自顯影對雜交結果進行檢測。Southerm blot 不僅可以定位地確定DNA 中的特異序列,而且還可根據DNA 片段在凝膠中的泳動距離確定特異DNA 片段分子質量的大小及其含量。

在進行Southernblot時,先以限制性內切酶消化待檢的DNA片段,進行瓊脂糖凝膠電泳,再在凝膠上貼蓋硝電泳完畢後,將凝膠放人鹼性溶液中,使雙DNA鏈變性解離為兩條單鏈,酸纖維素膜,使膠上單鏈DNA區帶按原來的位置吸印到膜上。再將此膜置於含有同位素標記的核酸探針的雜交液中反應。按照鹼基配對原理,如果被檢DNA片段與核酸探針具有互補序列,就能在被檢DNA的區帶部位結合成雙鏈的雜交分子,並通過放射自顯影顯示出來。

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