傳染性胰腺壞死病毒IPNV

傳染性胰腺壞死病病毒(IPNV),建議IPNV為雙RNA病毒屬(Birnavirus)。病毒顆粒呈正20面體,無囊膜,有92個殼粒,直徑約50~75nm,衣殼內包有1由2個片段組成的雙股RNA基因;是已知魚類病毒中最小韻RNA病毒。

基本介紹

  • 中醫病名:傳染性胰腺壞死病毒
  • 英文名稱:IPNV
  • 多發群體:魚類
  • 常見症狀:遊動失調,常作垂直迴轉遊動,不久便沉入水底,伺歇片刻後又重複以上遊動,直至死亡
傳入和分布,基本特徵,生態影響,

傳入和分布

(INTRODUCTION AND DISTRIBUTION)
l 首次記錄(年,地區,參考文獻)
l 定殖 最重要的傳染源是帶有病毒的成魚,病後殘存的魚可數年以至終身成為帶有病毒者,從腎、脾、肝、性腺、糞便中均可檢出IPNV,其中以腎臟的檢出率為最高。另外從圓口類到硬骨魚類20個科的魚體上也發現有IPNV,且多數肉眼觀察魚呈正常狀態;在軟體動物、甲殼動物和魚類寄生吸蟲的後囊蚴上也分離到IPNV;人工將IPNV強制投餵雞、貓頭鷹、海鷗及鼬後,在它們的糞便中均檢出具有感染力的IPNV,這些暗示它們也可能是IPN的傳播者。
l 主要宿主範圍及傳播途徑 敏感魚類有美洲紅點鮭、虹鱒、河鱒、克氏鮭、銀大馬哈魚、大口玫瑰大馬哈魚、湖紅點鮭、大西洋鮭、大鱗大馬哈魚等,主要危害14~70日齡的魚苗、魚種,在水溫10~12℃之死亡率可高達80~100%,魚越小死亡率越高。
l 來源 加拿大、美國
l分布 IPN最早發生在加拿大、美國後來在丹麥、法國、希臘、捷克斯洛伐克、英國、德國、挪威、義大利、南斯拉夫、瑞典、日本等國發生流行,於本世紀80年代又傳入朝鮮、中國台灣省及東北、山西、山東、甘肅等地。是魚類口岸檢疫的第一類檢疫對象。

基本特徵

1、理化特性
在氯化銫中,病毒的浮力密度為1.33g/mL,沉降係數為;435S,病毒顆粒的分子量為55×10s道爾頓,全部衣殼蛋白重量為50.2×106道爾頓;RNA為4.8×10道爾鎖,占病毒顆粒重量的8.7%;RNA在硫酸銫中的浮力密度為1.60~1.615g/mL,在蔗糖梯度溶液中沉降係數為14S。病毒的鉑構蛋白按大小可分為三個等級,最大一個多肽重105 000道爾頓,占整個分子量4%,它是連結RNA的多聚酶;中等大小多肽重54 000道爾頓,占總重62%,它是主要的殼粒蛋白,抗體由它刺激產生;兩個內部的小蛋白分別重31 000道爾頓,占總重28%和29 000道爾頓,占總重6%。IPNV現已知有VR299、Sp、Ab、He株等,這些株在血清學上、敏感性上及病原性上都有些不同。
病毒易在RTG-2、PG、RI、CHSE-214、AS、BP-2、EPC等魚細胞株上增殖,出現CPE;而接種到CAR、CLC及CO等魚細胞株上無CPE出現,病毒滴度也低。生長溫度為4~27.5℃;如在培養時溫度慢慢地升高,病毒能在30℃生長;最適生長溫度為15~20℃。病毒在胞漿內合成和成熟,並形成包涵體。病毒生長在RTG-2細胞株上,24℃時5小時內產生新病毒,而15℃時產生新病毒須8小時,但此溫度產生病毒量更多。病毒引起RTG-2細胞病變,26℃時在感染9小時後出現,20℃在感染18小時後出現,4℃需幾天后才出現,20℃時2~3天就可看到空斑,核固縮,細胞變長,相互分離,並脫離瓶壁;但對病毒抵抗力強的細胞,核雖已固縮,仍貼在瓶壁上,因此空斑大多呈網狀,特別是空斑的邊緣,健全和變性的細胞相互混雜。Ab株不能在FHM細胞株上生長。
IPNV對乙醚及氯仿不敏感,對甘油也很穩定,能保:存在50%甘油中數年以上(法國的Kerlo株在50%甘油中,4℃3個月內即失去感染力;pH的忍耐範圍是4~10;較能耐高溫,在60℃的生理鹽水中30分鐘才失活;在過濾除菌的4℃水體,感染力可保持5~6個月以上;在10℃自來水中,可保持7個月以上,但在未經處理、且有藻類的水中,14天后就不能檢測到病毒;大部分株能耐一20℃以下低溫,冷凍乾燥後,保存在4℃,至少在4年內不喪失感染力。對酸不敏感,pH 3中30分鐘,侵染率為100%;對鹼敏感,pHll時侵染率僅0.01%。氯、福馬林、碘、臭氧和pH在一定濃度和時間下都具有殺病毒作用。
病毒可在培養細胞上誘導產生干擾素,VR299株在FHM細胞株上誘出的干擾素量取決於溫度,在15℃、20℃、26℃、30℃中,26℃干擾素產量最高:干擾素對熱、pH不敏感,並具有不透析性,在高速離心下不沉降,其活力易受胰酶和。·巰基乙醇影響,對DNA和RNA酶有抗性。在RTG-2細胞株上產生的干擾素的分子量估計為94 000道爾頓。
2、症狀
病魚遊動失調,常作垂直迴轉遊動,不久便沉入水底,伺歇片刻後又重複以上遊動,直至死亡,一般從開始迴轉遊動至死亡僅1~2小時。在流水池中失去遊動能力的病魚匯集在排水口的攔網上。病魚體色發黑、眼球突出、腹部膨大,腹部及鰭基部充血,鰓呈淡紅色,肛門處常拖有1條線狀粘液便。剖開魚腹有時可見有腹水,幽門垂出血,肝、脾、腎、心臟異常蒼白;消化道內通常沒有食物,而有乳白色或淡黃色粘液,這些粘液祥物通常在5~10%的福馬林中不凝固,這具有診斷價值。
3、病理變化
最明顯的特徵是胰腺壞死,胰腺泡、胰島及所有的細胞幾乎都發生異常,多數細胞壞死,特別是核固縮、核碎裂十分顯著,有些細胞的胞漿內有包涵體。工藤等(1973)用光鏡觀察到的胞漿內包涵體及其類似體,用電鏡確認為細胞溶酶體,其中不僅有病毒顆粒,還有變性的細胞器。IPNV存在於胰腺泡細胞、肝細胞、枯否氏細胞的胞漿內,浸潤在胰腺的巨噬細胞和遊走細胞的胞漿內也有病毒顆粒。胰腺周圍的脂肪組織也發生壞死,骨骼肌發生玻璃樣變;疾病後期,腎臟的造血組織和腎小管也發生變性、壞死,肝臟局灶性壞死,消化道的黏膜發生變性、壞死、剝離。
4、診斷
(1)根據症狀及流行情況進行初步診斷。首先觀察發病的魚是否是對傳染性胰腺壞死病易感的種類,然後結合病魚遊動行為及特有的內、外部症狀作出初步判斷。病魚的內臟器—宮通常蒼白,尤其是腸道中沒有食物,而有許多在5~10%福馬林中不凝固的粘液樣物質,這些可增加此病診斷的正確性;同時還必須調查魚卵、魚種的來源,水源狀況,發病史。
(2)病理學檢查可發現胰腺壞死,但如果病魚出現和IHN、VHS樣的腎、肝、腸組織病變,則給診斷造成困難,不過IPN不發生像IHN那樣的消化道顆粒細胞壞死現象。
(3)用RTG-2細胞株分離病毒,觀察CPE,可作出進一步診斷。但當發生混合感染,如IPN和VHS混合感染時,則接種在RTG-2細胞株上,24小時後CPE與IPN的相似,48小時後則與VHSV的相似,這時就必須進行對乙醚、甘油、pH的敏感性試驗,IPNV在RTG-2細胞株上,pH7.2~7.6都顯示明顯CPE,對乙醚不敏感,對甘油穩定;而VHSV在RTG-2細胞株上,pH7.2不顯示CPE或不明顯,pH7.6時顯示明顯CPE,對乙醚敏感,在50%甘油中失去感染性。
(4)最後確診
①中和試驗,由於IPNV的血清型很多,作為診斷有必要使用多價抗血清,美國東部魚病研究所現已製成多價抗IPNV血清(7株)。
②補體結合法,採用已知病毒可鎔性抗原以測定病魚血清中有無相應抗體,特異性較中和試驗低,但由於補體結合抗原出現早,消失快,可用於早期診斷。
③直接螢光抗體法能迅速正確地檢出在組織及培養細胞內的病毒。用RTG—2細胞,20~C培養3~4小時就可檢出,且血清型丕同株伺不會引起交叉反應。
④酶聯免疫吸附試驗(ELISA),在發病季節,可在24小時內確診流行病是否由IPNV引起,魚卵可在48小時左右確定是否被IPNV污染;·對外觀無疲狀的成魚可在24小時左右檢測血中是否有抗IPNV的抗體。該方法具有速度快、靈敏度高;特異性強、操作方便等優點。中國科學院水生生物研究所魚病寶病毒組已製備成試劑盒。

生態影響

(ECOSYSTEM)
IPNV在河水、井水中,4℃能保持10天,15℃保持5天穩定;在?4~10℃的海水中,經4~10星期感染力幾乎無損失,5~6個月後喪失99%;在室內於燥狀態5星期後還保留少量感染力,所以水和空氣都可能是傳播的媒介。IPNV可經過卵而進行垂直傳播,也可隨病魚的糞、尿、性腺分泌物而排入水中,進行水平傳播。經鰓及口而感染。潛伏期的長短與魚種大小、水溫高低等有關,魚種越大,潛伏期越長;在病毒生長適溫範圍內,溫度越高,潛伏期越短,如在水溫12~14℃時,魚苗至小魚種感染後5~8天就發病,同時開始死亡,稍大些的魚種須10~12天才開始死亡。
(1)加強綜合預防措施,嚴格執行檢疫制度,不將帶有IPNV的魚卵、魚苗、魚種及親魚輸出或運人。
(2)發現疫情要進行徹底消毒,病魚必須銷毀,用濃度為200×10的有效氯消毒魚池;在8~10℃時,工具用2%福馬林或氫氧化鈉水溶液(pH12.2)消毒10分鐘。
(3)建立基地,培育無IPNV的魚種,嚴禁混養未經檢疫的其他種類的魚。
(4)發眼卵用伏碘(Betadine,PVP-I,商品名為10%複方皮維碘溶液)水溶液消毒,濃度為50×10的有效碘水溶液,藥浴15分鐘;如水的pH高,須用(60~100)×10濃度。經該方法處理後的魚卵孵出的魚苗,有時仍發生IPN,可能IPNV還在卵內或藥液難以到達的卵表面的某些部位。
(5)疾病早期用PVP—I拌飼投喂,每千克魚每天用有效碘1.64~1.91g,連餵15天,死亡率可降低。
(6)一般在水溫10℃以下可減少IPN發生和降低死亡率,因此可將病魚放在低水溫的環境中飼養,以控制疾病的發展,或在發病季節將易感幼魚放在低水溫中飼養,待發病期過後再遷回,但這方法較難推廣。
(7)大黃等中草藥拌飼投喂,有防治作用。
(8)2 500尾0.4g仔魚投餵6mg植物血球凝集素(PHA),分兩次喂,間隔15天,據報導對預防IPN有一定效果。

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