中期阻斷法

中期阻斷法是通過抑制有絲分裂過程中紡錘體微管聚合,可使細胞周期阻斷在有絲分裂的中期,從而得到同步於M期的細胞。常用的藥物有秋水仙鹼和秋水仙醯胺,後者毒性較小。優點是無非均衡生長現象,缺點是可逆性較差。過去研究中也發現,同步後的細胞的生長能力明顯不如撤去阻斷劑後得到的S期細胞旺盛。

秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻斷劑。經過同步化之後的細胞可以通過流式細胞術對其周期進行分析。將細胞用PI(碘化丙啶)染液進行染色,使用流式細胞儀對細胞內DNA的相對含量進行測定,可分析細胞周期各時相的百分比。由於細胞的DNA含量在不同時期有顯著的差異,因此可以將細胞分成G1/G0期(1倍),S期(1-2倍)和G2/M期(2倍)。流式細胞儀可以根據DNA含量在不同時間內的變化,從而確定細胞周期的長短,也可以直接標記DNA複製(放射性同位素標記),統計細胞數量與標記細胞的百分比,對細胞周期進行綜合分析。

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