《酪氨酸激酶Pyk2對小鼠著床前胚胎細胞增殖和存活的影響》是依託山東師範大學，由孟小倩擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：酪氨酸激酶Pyk2對小鼠著床前胚胎細胞增殖和存活的影響
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孟小倩
- 依託單位：山東師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Pyk2是一種非受體酪氨酸激酶，參與細胞遷移、粘附、增殖、分化、凋亡等多種生理過程。我們以前的研究工作中發現Pyk2在小鼠卵母細胞減數分裂成熟、受精及早期胚胎髮育的過程中表達，在著床前的胚胎細胞中Pyk2除分布在細胞質中外，更多地聚集在細胞核中和凝集的染色體上。為了闡明這種定位的本質，揭示Pyk2在著床前胚胎髮育過程中的作用機制，本課題擬採用RNA干涉、免疫螢光定位、實時螢光定量PCR、Western-blot等技術研究Pyk2對小鼠著床前胚胎細胞增殖和存活的影響，探索Pyk2對早期胚胎中表達的重要轉錄因子和DNA甲基化、組蛋白甲基化、乙醯化、磷酸化等表觀遺傳修飾可能具有的調節作用。本研究對闡明酪氨酸激酶在早期胚胎細胞增殖中的作用，揭示胚胎細胞增殖和發育的分子機制具有重要的意義，同時也為克隆和輔助生殖技術的完善提供理論借鑑。
結題摘要
與原計畫書比較，本研究完成了大部分研究內容，包括Pyk2及其磷酸化形式在小鼠早期胚胎髮育過程中的定位、Pyk2mRNA在小鼠早期胚胎髮育過程中的表達、RNA干擾系統的建立、Pyk2siRNA下調其表達後對早期胚胎髮育的影響等，取得了一定的研究成果。另外，在現有條件下，在原計畫的基礎上，對研究內容進行了拓展，對Pyk2在小鼠卵母細胞減數分裂成熟過程中的定位及功能及FAK在小鼠卵母細胞成熟、受精及早期胚胎髮育中的定位及功能進行了進一步的探索。Pyk2是粘著斑激酶家族(focal adhesion kinase family，FAK family)的成員，它屬於非受體型酪氨酸蛋白激酶。黏著斑激酶家族的成員包括 Pyk2和FAK。Pyk2和FAK在卵子中表達量都相對較高，但是其在卵子成熟受精及胚胎髮育過程中的機制卻了解不多。本研究套用共聚焦顯微術、Westernblot、RNAi、抑制劑干擾、實時螢光定量PCR等方法研究了Pyk2及FAK在小鼠卵子成熟、受精及胚胎髮育過程中的定位、分布及可能具有的功能。發現在小鼠卵子成熟過程中p-Pyk2與γ-tubulin存在共定位關係，可能通過調節γ-tubulin的磷酸化來參與了微管的聚合及紡錘體的組裝。在受精和胚胎髮育過程中，Pyk2主要定位於精子的頭部、皮質及受精卵和胚胎的細胞核及細胞質中，用RNAi下調Pyk2的表達後，可以一定程度上抑制胚胎細胞的增殖，降低其發育率，Pyk2可能參與了小鼠精子入卵和早期胚胎髮育的調控。本文還對FAK在卵母細胞和早期胚胎髮育過程中的定位及功能進行研究。發現FAK以及pY397FAK、pY576/577FAK定位在卵母細胞的皮質部位；在受精卵及2、4、8細胞各時期，FAK在皮質部位及細胞核中定位，在細胞與細胞的連線處有弱分布；在桑葚胚和囊胚時期，FAK定位於細胞的頂部及基底部以及細胞與細胞的連線處和細胞核中。本研究發現一定程度上闡明了FAK家族激酶在小鼠卵子成熟、受精和胚胎髮育過程中的定位及可能的功能，揭示哺乳動物卵子成熟及胚胎髮育機制，為深入研究此過程提供借鑑。
