分裂過程
細胞周期(cell cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,分為
間期與
分裂期兩個階段。
間期
1.G1期(first gap) 從
有絲分裂到DNA複製前的一段時期,又稱合成前期,此期主要合成RNA和
核糖體。該期特點是
物質代謝活躍,迅速合成RNA和蛋白質,細胞體積顯著增大。這一期的主要意義在於為下階段S期的DNA複製作好物質和能量的準備。
2.S期(synthesis) 即DNA合成期,在此期,除了合成DNA外,同時還要合成
組蛋白。DNA複製所需要的酶都在這一時期合成。
3.G2期(second gap)期為DNA合成後期,是
有絲分裂的準備期。在這一時期,DNA合成終止,大量合成RNA及蛋白質,包括
微管蛋白和
促成熟因子等。
分裂期
細胞的
有絲分裂(mitosis)需經前、中、後,末期,是一個連續變化過程,由一個母細胞分裂成為兩個子細胞。一般需1~2小時。
2. 中期(metaphase)細胞變為球形,核仁與核被膜已完全消失。染色體均移到細胞的赤道平面,從紡錘體兩極發出的微管附著於每一個染色體的
著絲點上。從中期細胞可分離得到完整的染色體群,共46個,其中44個為
常染色體,2個為
性染色體。男性的
染色體組型為44+XY,女性為44+XX。分離的染色體呈短粗棒狀或髮夾狀,均由兩個
染色單體借狹窄的著絲點連線構成。
3.後期(anaphase)由於
紡錘體微管的活動,著絲點
縱裂,每一染色體的兩個染色單體分開,並向相反方向移動,接近各自的
中心體,染色單體遂分為兩組。與此同時,細胞波拉長,並由於
赤道板細胞膜下方環行微絲束的活動,該部縮窄,細胞遂呈啞 鈴形。
4.末期(telophase)染色單體逐漸解螺旋,重新出現
染色質絲與
核仁;
內質網囊泡組合為
核被膜;組胞赤道板縮窄加深,最後完全分裂為兩個2倍體的
子細胞。
分類
根據在
細胞周期(cell cycle)中的時間順序,可將
checkpoint分為三類
1:
G1期 (Restriction) Checkpoint
2:G2 Checkpoint
3:Metaphase Checkpoint (細胞
分裂期,
M期)
調控內容
類別
1:
DNA損傷檢查點(DNAdamage checkpoint) 負責查看DNA有無損傷;
2:DNA複製檢查點(DNAreplication checkpoint) 負責DNA複製的進度;
3:
紡錘體組裝檢查點(spindleassembly checkpoint) 管理染色體的正確分配已否,因為染色體的分配主要依賴於
紡錘體的作用。
周期
以
有絲分裂方式增殖的細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束所經歷的過程。這一過程周而復始。
細胞周期是50年代
細胞學上重大發現之一。在這之前認為有絲分裂期是
細胞增殖周期中的主要階段,而把處於
分裂間期的細胞視為細胞的靜止階段
。1951 年
霍華德等用P-磷酸鹽標記了蠶豆根尖細胞,通過
放射自顯影研究根尖細胞DNA合成的時間間隔,觀察到P之摻入不是在有絲分裂期,而是在有絲分裂前的
間期中的一段時間內。發現間期內有一個DNA合成期(
S期),P只在這時才摻入到DNA;S期和
分裂期(
M期)之間有一個間隙無P摻入,稱為
G2期,在M期和S期之間有另一個間隙稱為
G1期,G1期也不能合成DNA。
細胞生命活動大部分時間是在間期度過的,如大鼠角膜
上皮細胞的
細胞周期內,間期占14000分鐘。分裂期僅占70分鐘。細胞周期各階段都有複雜的生化變化。間期是細胞合成DNA、RNA、蛋白質和各種酶的時期,是為細胞分裂準備物質基礎的主要階段。
在一個增殖的細胞群中,所有細胞並非是同步增殖的,它們在細胞周期運行中,可能有四種命運:
②停止於
G2期,稱為G2期細胞(R2),它受某種刺激後可進入周期;
④喪失生命力近於死亡的細胞,稱為丟失細胞,或稱不再分裂的細胞。繼續分裂的細胞沿著
細胞周期從一個有絲分裂期到下一個
分裂期。不再分裂的細胞離開了細胞周期不再分裂,最終死亡。
G1期
細胞體積逐漸增大,製造RNA(包括tRNA,mRNA,rRNA以及
核糖體等)。RNA的合成又導致
結構蛋白和
酶蛋白的形成,這些酶又控制著形成新細胞成分的代謝活動。G1又分為G1早期和G1晚期兩個階段;細胞在G1早期中合成各種在
G1期內所特有的RNA和蛋白質,而在G1晚期至
S期則轉為合成DNA複製所需要的若干前體物和酶分子,包括
胸腺嘧啶激酶、胸腺嘧啶核苷酸激酶、
脫氧胸腺嘧啶核苷酸合成酶等,特別是
DNA聚合酶急劇增高。這些酶活性的增高對於充分利用核酸
底物在S期合成DNA是不可少的條件。
G1期持續時間變異很大,多數細胞的G1期較長,是與細胞需要增加質量有關。但在某些
單細胞生物如大變形蟲、
四膜蟲和
多細胞生物的某些細胞(如海膽胚胎,小鼠胚胎細胞)則無
G1期,
中國倉鼠卵巢細胞的變異株無G1和
G2期,以致
M期和S期連線在一起。G1期的長短之所以變化很大,與G1期記憶體在一個校正點或阻止點(簡稱R點)有關。R點主要控制 G1期時間的長短。通過了此點,細胞就能以正常速度不受外界條件的影響而完成
細胞周期的其他時期。因此,有人認為細胞的生長是在G1期R點上停止的,例如當細胞內環
腺苷酸(cAMP)水平增高,細胞密度增加時,可阻止細胞從G1期向
S期過渡,用
嘌呤黴素抑制
蛋白質合成或用
放射線菌素D抑制RNA合成,也能延緩細胞從G1期進入S期。有人發現 G1期內能合成一種有觸發作用的蛋白質;它是不穩定的,極易被分解,故稱為v蛋白。v蛋白在G1細胞中達到一定水平時,細胞便可通過R點進入S期。
細胞進入
G1期後,並不是毫無例外地都進入下一期繼續增殖,在此時可能會出現三種不同前景的細胞:①
增殖細胞:這種細胞能及時從G1期進入S期,並保持旺盛的分裂能力。例如消化道
上皮細胞及
骨髓細胞等;②暫不增殖細胞或
休止細胞:這類細胞進入G1期後不立即轉入
S期,在需要時,如損傷、手術等,才進入S期繼續增殖。例如
肝細胞及
腎小管上皮細胞等;③不增殖細胞:此種細胞進入G1期後,失去分裂能力,終身處於G1期,最後通過分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神經細胞、
肌細胞及成熟的紅細胞等。
G0期
細胞周期的調節主要是通過
G1期的阻留而實現的,
G0期即指細胞處於阻留的狀態。細胞通過
M期一分為二,有的可繼續分裂進行周期循環,有的轉入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下,又可進入周期(圖1),合成DNA與分裂。G0期的特點為:①在未受刺激的G0細胞,DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在;②當G0細胞受到刺激而增殖時,又能合成DNA和進行細胞分裂。
S期
在這一階段完成DNA的合成以及合成與DNA組裝構成
染色質等有關的
組蛋白。DNA含量在此時期增加一倍。
S期終結時,每一染色體複製成兩個
染色單體(Hole,1979)。生成的兩個
子代DNA分子與原來DNA分子的結構完全相同。一個人體細胞核直徑10~20微米,其中DNA含量為10克,如拉成一根DNA鏈,長度可達3米。哺乳類動物細胞S期一般為6~8小時。
DNA的複製能在幾小時內完成,主要是由於DNA鏈分成許多的複製單位(
複製子)(可多達10000個左右),它們可在S期的不同時間分別複製。另外,在S期內還有組蛋白的合成──
組蛋白基因在G1-S期之間活化,組蛋白mRNA的
轉錄增大,並在整個
S期內連續進行。已合成的
組蛋白使新合成的DNA很快轉為核組蛋白複合體。
S期細胞含有一種因素能誘導DNA合成,用
細胞融合實驗證明,G1細胞在與S期細胞融合後能加速其核內DNA複製的起點啟動。S期不同階段複製的DNA
鹼基組成是不同的,早期複製的DNA富有G-C
鹼基,晚期複製的DNA富有A-T鹼基,即
常染色質比
異染色質複製較早。
G2期
是DNA複製結束和開始
有絲分裂之間的間隙,在這期間細胞合成某些蛋白質和RNA分子,為進入有絲分裂提供物質條件。用放射標記的RNA前體和蛋白質前體示蹤,表明
G2期進行著強烈的RNA和蛋白質的合成。假如破壞這些合成過程,細胞就不能過渡到
M期。G2期合成的是染色體濃縮以及形成
有絲分裂器所需的成分。有人認為G2期繼續完成從
S期就開始的
微管蛋白的合成,為M期
紡錘絲的組裝提供原料。在G2晚期開始合成有絲分裂因子。在某些缺少
G1期細胞中,G2期更為複雜,還要擔負起其他細胞G1期中所要完成的事件。也有少數情況,S期結束後立即開始有絲分裂,而不存在G2期。
M期
有絲分裂時期,是細胞形態結構發生急速變化的時期,包括一系列核的變化、
染色質的濃縮、
紡錘體的出現,以及染色體精確均等地分配到兩個子細胞中的過程,使分裂後的細胞保持遺傳上的一致性。
M期分為前期、中期、後期和末期(見有絲分裂)。M期雖是形態變化最為顯著的時期,但其
呼吸作用反而降低,
蛋白質合成明顯下降,RNA合成及其他代謝周轉停止,這是由於有絲分裂期所需要的能量和其他基本物質均在
間期內合成和貯備好了有關。
工作方式
分類
從檢查點的工作方式來看,又可分為三個部分
1:探測器(sensor), 負責檢查質量問題;
2:感測器(signaltransducer), 負責信號傳遞;
3:
效應器(effector), 由效應器去中斷
細胞周期進程並開動修復機制。
步驟
Ⅰ、樣品準備
A、組織單細胞懸浮液(如
淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細胞)
Ⅱ、反應體系-DNA低滲緩衝液
Triton-X 100 0.75ml
Propidium iodide 0.025g
我們將該DNA
低滲溶液於密閉瓶子中存放數月後並無發現有任何染色活性的丟失
Ⅲ、染色
1、 每一個管子中放入1×106個細胞;
2、 樣品離心後儘可能完全地移去
上清液,並且不要打碎沉澱塊;
3、加入1ml的DNA低滲染色(可用
甲基綠進行染色)緩衝液至沉澱中,並混勻;
4、 樣品於4℃下避光30分鐘或最長不超過1個小時以備
流式細胞儀分析。
注意:延長在低滲緩衝液的曝光時間會引起樣品碎片的增加。
細胞周期檢測可以作為
生物相容性評價指標,示例如下:套用體外
細胞培養法,觀察不同
質量分數羥基磷灰石浸提液對L-929細胞的細胞學形態的影響,同時採用MTT比色法評價羥基磷灰石對L-929生長和增殖的影響,流式細胞儀檢測羥基磷灰石浸提液對L-929細胞生長周期及凋亡的影響。結果表明,羥基磷灰石浸提液對體外培養的細胞形態無明顯影響,對細胞生長和增殖無明顯抑制作用;不同質量分數材料浸提液的
細胞毒性為 0~1級,隨羥基磷灰石浸提液質量分數的升高,
細胞凋亡率逐漸上升;50%、75%、100%
羥基磷灰石浸提液組能明顯降低G0 /G1 期細胞比例,增加S,G2 /
M期細胞比例,能增加L-929細胞DNA的合成,促進細胞生長和
組織修復。