管狀凝膠

梯度凝膠電泳

梯度凝膠電泳分離生物大分子具有分辨力高、條帶清晰的特點，特別適於分離γ-谷氨酞轉肽酶一類膜結合蛋白。此外還可利用濃度梯度聚丙烯酞胺凝膠電泳測定分子量。這種方法多是用垂直平板凝膠。下面介紹一套自製管狀梯度凝膠的裝置和製備凝膠的方法。用這種方法，既節省試劑，又可以裝入任何立式盤電泳槽中，使用也極方便。

梯度發生器和管狀凝膠製備裝置

管狀梯度發生器

與一般梯度發生器相同，可用有機玻璃製作。

管狀凝膠製備裝置

裝置由厚0.5 cm的有機玻璃製成。取兩塊14 X 14cm的有機玻璃板（C板及D板），用圓規按尺寸準確分格（共24格）。將舊鋼鋸片兩段捆在一起，在砂輪小溝底板上磨出一把斜形溝刀，用它在C板上相對兩個分點之間過圓心拉出深為0.15 cm的小溝。D板上用鑽在24個分點和圓心上鑽直徑0.7 cm的小孔。再將C, D兩板重疊，分點準確相對，在四周滴加氯仿粘合。再取24個鏈黴素膠瓶塞，塞膠瓶塞。將玻管插入膠瓶塞的中孔內，然後將帶膠塞的玻璃管塞入制凝膠裝置的小孔內，即完成裝管工作。

管狀凝膠的製備

按上述方法將玻管全部裝入制膠裝置中，取一條小塑膠管，在其一端套上一個鏈黴素膠瓶塞，將瓶塞塞入制膠裝置中心小孔。小塑膠管另一端接上一支注射器，注入蒸餾水，驅趕出管道中的氣泡，然後反抽蒸餾水，待水達玻璃管底部夾死塑膠管再將塑膠管接上梯度發生器。將已配好的4%和30%聚丙烯酞胺溶液分別加入發生器前後兩圓筒中，開動電磁攪拌器混合前面圓筒中溶液，打開兩圓筒之間和流出口前的夾子，由於發生器與制膠裝置高度不同，混合好的凝膠可緩緩地流入各個小玻璃管中。如果用電子微動泵控制流速更為理想。當凝膠溶液流完（約10分鐘），立即用注射器注入含溴酚藍的40%蔗糖溶液（注意防止帶入氣泡），當紫色液達小玻管底部後夾死塑膠管。待凝膠聚合後就可用來進行電泳。

管狀凝膠實際套用舉例

曾對人胎肝、腎、胰等組織和膽汁的γ-谷氨酞轉肽酶分子量進行測定，其方法是將制好的4-30%濃度梯度凝膠管裝入立式電泳槽中，電泳槽加入pH8.9 Tris-HCl凝膠緩衝液，10℃, 70伏電壓預電泳20-30分鐘。除去凝膠緩衝液再換上pH8.3的Tris-甘氨酸電極緩衝液，分別在小管頂部加入γ-谷氨酞轉肽酶樣品和高分子量標準蛋白質，樣品中含20%蔗糖，以溴酚藍指示。先70伏電泳15分鐘，再升高電壓至220伏，10℃；恆壓電泳3-4小時。電泳後用一般方法剝膠，酶樣品凝膠進行酶定位染色，標準蛋白凝膠進行蛋白染色。將標準蛋白質的分子量對數值對其相應的Rf值作圖得曲線，再由曲線求酶的分子量。由曲線求得人胎肝和膽汁小分子γ-谷氨酸轉肽酶分子量是86000Da。