澱粉酶檢測試劑盒是用於體外測定人體血清或尿液中澱粉酶含量及活力的檢測儀器。人血清α-澱粉酶主要來源於胰腺和唾液腺，其測定是急性胰腺炎的主要診斷指標。
基本介紹
- 中文名：澱粉酶檢測試劑盒
- 外文名：AmylaseAssay Kit
- 管理類別：Ⅱ類醫療器械
- 分類名稱：臨床檢驗分析儀器
定義,背景,檢測原理,適用範圍,正常值參考範圍及其臨床意義,人α-澱粉酶ELISA檢測試劑盒使用方法,試劑盒性能,操作人員注意事項,操作過程注意事項,試劑盒樣品收集、處理及保存方法,
定義
背景
人體內的澱粉酶是α-澱粉酶，又稱為澱粉內切酶。血清澱粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌，其他組織，如心臟、肝臟、肺臟、甲狀腺、卵巢等含量較少。血清澱粉酶屬水解酶類，能催化澱粉和糖原水解，不僅作用於澱粉的末端，還可作用於澱粉分子內部的α-1，4糖苷鍵，降解產物為葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6糖苷鍵支鏈的糊精，對食物中多糖化合物的消化起重要作用。血清澱粉酶主要有兩種同工酶，來自胰腺的為澱粉酶同工酶P（P-Amy），來自唾液腺的為澱粉酶同工酶S（S-Amy）。血清澱粉酶測定主要用於急性胰腺炎的診斷。
檢測原理
澱粉在α-澱粉酶的催化作用下，水解為葡萄糖、麥芽糖及糊精。在澱粉基質過量情況下，反應後加入碘液與未被水解的澱粉結合成藍色複合物。將此藍色複合物的深淺與未經酶促水解反應的空白管對照，從而推算出水解的澱粉量，計算澱粉酶活力單位。由於各試劑盒的緩衝液、底物、pH 值的不同及選擇的波長有差異，樣本體積分數、摩爾消光係數ε不同，會影響它們的因數、參考值及線性範圍。
適用範圍
1. 急、慢性胰腺炎。
2. 胰管阻塞。
3. 出現腹部不適、厭食和食慾亢進等症狀時。
4. 腮腺炎。
5. 逆行膽胰管造影后的隨訪。
正常值參考範圍及其臨床意義
人α-澱粉酶ELISA檢測試劑盒使用方法
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的儘量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋後加入50μl於反應孔內。
3. 加入稀釋好後的標準品50μl於反應孔、加入待測樣品50μl於反應孔內。立即加入50μl的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振盪混勻，37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍乾。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80μl的親和鏈酶素-HRP，輕輕振盪混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振盪30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍乾。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50μl，輕輕振盪混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50μl終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值(Optical Density：吸光度)。
如圖1所示。
圖1ELISA試劑盒操作方法試劑盒性能
1. 靈敏度
最小的檢測濃度小於1號標準品。樣品線性回歸與預期濃度相關係數R值為0.990。
2. 特異性
不與其它細胞因子反應。
3. 重複性
板內、板間變異係數均小於10%。
4. 檢測值範圍
0-1600U/L
5. 敏感度
1.0 U/L
操作人員注意事項
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請儘快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽菸或使用化妝品。
3．不要用嘴吸取試劑盒裡的任何成分。
操作過程注意事項
1. 試劑應按標籤說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過後的標準品應丟棄，不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質期前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用乾淨的塑膠容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裡的各種成分及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍乾，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A易揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1. 血清
操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液後，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿
EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3. 細胞上清液
1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿
將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5. 保存
如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反覆冷凍。儘可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
