反向打點雜交技術

反向打點雜交技術(reverse line blot hybridization,RLB hybridization)是一種分子遺傳學研究手段,由Innner等人於1983年首創的等位基因特異性寡核苷酸探針雜交技術上發展起來,由聚合酶鏈式反應(PCR)技術創立者之一Saiki等人改進並建立的。

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內容簡介
傳統的A.SCI探針雜交技術是將靶DNA(基因組DNA或PCR擴增片段)點在膜上,使其與液相中的探針退火,經洗膜後檢出信號,而改進後的技術是將 .}ao探引固定在尼龍膜上,用擴增的nvn樣品與膜上探針雜交。由於A5U探針長度有限(一般為l5一?}個鹼基),為使探針序列不受固定過程的影響,與A5U合成後,用末端轉移酶在其3‘-端加一段多聚核苷酸(dT,胸腺嘧啶)尾(一般為4ix個左右),這種帶尾的A5C3點在膜上後,經紫外光照射。其多聚 dT即可與尼龍膜表面的氨基發生作用,自我結合在膜條上。這一個“反向”體系的突出特點之一是能將多種不同序列的 A5C1均固定在同一條膜上。關鍵是,4Sf}的設計需根據其鹼基組成選擇探乍1-長度,以使各種固定的nao在雜交時具有儘可能接近的解鏈溫度Tmelt。這樣一張膜經一次雜交即可鑑定出樣品中多種不同的突變。其缺點是對!幾術知IOTA序列及其突變類型的檢測對象無能為力。本方法主要是作為基因診斷、遺傳病、基因多態性及癌症因子分析等領域

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