吖啶橙

吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖啶鹽酸鹽，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl₂, 分子量438.12g/mol,是一種螢光色素，其檢測激發濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm。它與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的螢光，與DNA結合量少發綠色螢光，與RNA結合量多發桔黃色或桔紅色螢光。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在螢光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻螢光；而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上緻密濃染的黃綠色螢光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃螢光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細胞使之產生桔黃色螢光，由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌於兩個相鄰的鹼基對之間，這樣在DNA複製過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個鹼基，造成移碼突變。吖啶橙染液有毒，操作時要戴手套，需避光。

2017年10月27日，世界衛生組織國際癌症研究機構公布的致癌物清單初步整理參考，吖啶橙在3類致癌物（現有證據未能對人類致癌性進行分級評價）清單中。

基本介紹

• 中文名：吖啶橙
• 外文名：Acridine orange
• 別名：鹼性橙 14
• EINECS：233-353-6
• 分子量：369.96

名稱信息

中文名稱：	吖啶橙
中文別名：	鹼性橙 14； 丫啶橙;3,6-雙(二甲氨基)吖啶
CAS：	10127-02-3
MDL：	MFCD00081043
EINECS：	233-353-6
Beilstein：	3734978
分子式：	C17H19N3
英文名稱：	Basic Orange 14；Basic Orange 14; C.I. 46005; 3,6-Bis(dimethylamino)acridine zinc chloride hydrochloride
分子量：	369.96

基本信息

簡稱：AO

AO能與無機酸形成鹽，具有綠色螢光。如果再稀釋的話，便水解成游離的AO，而呈現紫色螢光。

吖啶橙/溴化乙錠雙螢光染色測定PC12細胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：

（1）細胞爬片：在6孔培養板中預先置入玻璃蓋玻片，接種細胞懸液，干預後，予95%乙醇固定15分鐘，微乾，然後準備螢光染色。將100mg/L溶於PBS的吖啶橙和100mg/L溶於PBS的溴化乙錠各5μl（臨用前混合加入，加樣量宜小，有時各2μl-5μl足夠，量太大容易形成細胞凋亡的假陽性），在照相前混勻後加入，輕輕吹打，30秒後用雷射共聚焦顯微鏡觀察照相。（有人用15mg吖啶橙溶於100ml pH6.8的PBS中過濾，避光保存）計取5個視野，共100個細胞中凋亡細胞百分數。

（2）如製成細胞懸液：取100μl PBS稀釋的細胞懸液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒後觀察攝像。

主要用途

用作螢光指示劑，腫瘤細胞及細菌、核酸染色劑及移碼突變的誘變劑。

吖啶橙是一種螢光色素，吖啶橙激發濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。吖啶橙與細胞中DNA和RNA結合量存在差別，可發出不同顏色的螢光（即著色特異性），這是由於DNA是個高度聚合物，吸收螢光物質的位置較少，發綠色螢光，而RNA聚合度低，能和螢光物質結合的位置多，故發紅色螢光。

質量標準

項目　電泳級

λmax., 50 % EtOH: 　 490 - 495 nm

E 1 %/1 cm, λmax.: 　> 1200 (EtOH 50 %)

乾燥損失Loss on drying: 　≤ 5 %

pH (1 %; H2O): 　約4.0 (20°C)

品級Grade 分子生物學級,≥80.0%

(for molecular biology，Dye Content ≥80.0%（HPLC))

外觀Appearance Red to Brown Powder

紅外光譜Infrared spectrum Conforms to Structure

水溶性Solubility c = 1mg/ml; Water，Dark Orange to Amber， Clear

氮Nitrogen 8.5- 12.5 %

染料含量Dye Content (HPLC) ≥80.0%

物化性質

橙色粉末。溶於水、乙醇。溶液為橙黃色帶綠色螢光。pH值為8.4～10.4則無螢光。能鑲嵌於兩個相鄰的鹼基對之間，使部分雙螺旋DNA鬆開，該兩個鹼 基對的距離拉大一倍。這樣的DNA複製過程中，會使DNA鏈增加或缺失一個鹼基，造成移碼突變。

熔點:165℃

相對密度:-

溶解性:soluble

安全信息

Risk：	R20/21/22Harmful by inhalation, in contact with skin and if swallowed.; 吸入、皮膚接觸及吞食有害。R68Possible risk of irreversible effects.; 可能有不可逆後果的危險。
Safety :	S36/37Wear suitable protective clothing and gloves.; 穿戴適當的防護服和手套。S45In case of accident or if you feel unwell, seek medical advice immediately (show the label whenever possible.); 若發生事故或感不適，立即就醫(可能的話，出示其標籤)。
Hazard :	Xn-Harmful; 有害物品; Xi-Irritant; 刺激性物品

致癌物說明

國際癌症研究所（IARC）對已進行致癌研究的化學物分為四類：一類，對人致癌性證據充分；二類，A組對人致癌性證據有限，但對動物致癌性證據充分，B組人致癌性證據有限，對動物致癌性證據也不充分；三類，現有證據未能對人類致癌性進行分級評價；四類，對人可能是非致癌物。